请教免疫组化中遇到的问题
有位研究生在我们公司定制胃癌芯片,然后提供抗体由我们做实验.
我们主要实验目的是:检测客户提供的抗体在客户定制的胃癌芯片上表达的结果
第一次预实验抗体用的浓度分别是1:400,1:800.结果均为阴性.
第二次预实验抗体用的浓度是1:200,1:400,1:800,并设置了阳性阴性对照.因此抗体属于研究性抗体,具体在什么组织上有阳性表达未知.所以设置一张实验外部的阳性对照.用另外一个抗体作阳性对照CK14在肺鳞癌上有阳性表达.证明实验操作过程中无误.实验中1:200的切片上有明显的阳性表达,在正常胃细胞核上和胃腺癌细胞上均有表达.
但是第三次预实验抗体用的浓度是1:100,1:200,结果芯片上没有一点阳性表达,但是阳性对照CK14在肺鳞癌上如第二次实验一样有阳性表达.
我的问题是:为什么后两次实验中阳性对照均有表达,而两次所检测的抗体结果却有那么明显的差异呢?一个为阳性,另一个却是阴性,是抗体不稳定,还是什么原因呢?敬请各位老师解答疑难,多谢了!
