永远

各位老师，我做免疫组化有一年多了，但是总觉得效果不是很好，比如说淋巴结，总是黄成一片，看很多老师做的片子都是包膜清晰，可我做的总觉得浑得要死，我怀疑和修复过程有关，但是不知道该怎么办才好，希望高手指点迷津，希望大家帮忙分析下原因，并能多给些修复的方法，谢谢！

永远

谢谢shanghainese老师，免疫组化的每一步都很重要，都很关键，关于抗体保存的问题，怎么知道抗体是否变性？有时候加抗体时，不小心碰到组织，抗体是不是会受到污染？还有就是我们用的是即用型抗体，对于这种应该怎么办呢？因为我们只用了迈新的试剂，有想过更换克隆号，不过到目前还没有来得及尝试。显色液是现配现用，所用的都是迈新的试剂。

永远

曾经有老师说我做的片子阳性信号很弱，甚至有假阴性，我加了对照片，并延长了一抗的孵育时间，由原来的37°一个小时增加到了37°一个半小时，阳性信号增强，但是对照片在我看来仍旧没有达到标准，我总怀疑是我修复过程有问题，我现在是水浴修复，电磁炉加热，水煮20分钟，然后放到保温档十分钟，自来水冲洗至室温，因为片子少，为了节省修复液，加热的锅内还放了个不锈钢的杯子，修复液是柠檬酸修复液，PH6.0，不知道老师我这样做有什么可以改进的没？或者老师现在使用的是什么样的修复方法，让学生学习一下，谢谢！

永远

谢谢shanghainese老师，我会继续努力！