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【求助】为什么TGF-beta1结果始终不好

【求助】为什么TGF-beta1结果始终不好

近来我在作TGF-beta1的免疫组化,我用的是老鼠脑组织,冰冻切片,可是作了很多次,都是背景很深,细胞看不见,只是偶尔可以看见阳性细胞,可是师兄师姐都做过,效果还可以。我换了不同的一抗浓度及用别人的二抗看了,仍然没有明显改变,背景仍然很深,也只是偶尔可以看见阳性细胞,而我同时作的另外一个指标效果却很好。请各位指教,到底是什么原因?还有我的冰冻切片冰晶很多,不知道冰晶会有影响吗?冰晶主要形成的原因是什么了?谢谢指教!!

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我是4%多聚甲醛灌注后,再后固定2到3个小时,然后20% 、30%蔗糖剃度脱水后,放在-70度冰箱保存后作切的。请问冰晶形成的原因是什么?固定不好?过糖不好?还是冷冻不好?

我师兄师姐作的是石蜡切片,所以也没有很好的意见。

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