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冰冻如何做出接近石蜡的效果(花费时间再长都可以)

动物实验?拿我们做的大鼠来说
1.新鲜组织应该用OTC包埋,放入液氮中速冻后-80度保存,而非-20度,组织都 坏了,注定实验肯定失败!
2.皮肤应该按切脂肪的 温度来设定,因为皮下组织含有大量脂肪,肝脏最好用速冻头快速冷冻避免冰晶化
3.冰冻切片固定直接染苏木素,10min(不知你们用的什么苏木素要这么长时间)一般4分钟左右,60度30s  的方法 我们没做过,但还是问问为什么没有分化这步?流水反蓝的时间太长一般5分钟左右,伊红不知道你们 是用的醇溶性,还是水溶性。
4.肌肉的细胞核在细胞外,可能是 横切造成的假象!
5.免疫组化最好用挂胶片,自己涂多聚赖氨酸,或者买现成的!影响免疫组化结果的因素太复杂,不好 说,就你的而言应该是前期组织没处理好更多一些!!



PS:那位老技师说的都是很有道理的 ,文化水平并不代表一切,实践经验有时候比书本知识更实用!
生气,是拿别人的错误来惩罚自己      踏踏实实做人,认认真真工作

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一般来说,冰冻切片要做成跟石蜡切片一样清晰透明,很难!
免疫组化的组织是做成切片固定后放-20还是组织直接存?肝脾肌肉我们设的是-20,脂肪-35
甲醛固定液的大分子可能会与组织末梢的蛋白质发生过度交联,掩盖抗原决定簇,造成免疫组化的假阴性,换4%的多聚甲醛会好一些。要高质量的切片,苏木素染色还是分化好些,否则容易核浆共染,HE染色液应该按步骤脱水,透明封片,放烤箱烤,容易引起细胞萎缩!挂胶片直接买现成的吧,太阳生物的AEPS不错,玻片很干净!肌肉可能是切冰冻切片的时候冰晶化了,细胞自溶!
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