fairyinsky

我做视神经的改良三色法染色，但是效果一直不好，绿色上色很浅，髓鞘没有上色，一直找不到原因，请高手帮忙。  
10％福尔马林固定20小时，常规石蜡包埋，切片厚5微米。（标本固定最少1个周，最长的3个月了；一开始切片厚3微米）
1.2试剂配制
①harris苏木素：将O.5g苏木素精加入5m1无水乙醇中溶解，将10g硫酸铝钾加入100 m1双蒸水中溶解，将两种溶液混匀后加热至沸,即加入0.25g黄色氧化汞,待溶解后在冰水中冷却,过滤后加入5m1冰醋酸。
②三色液：将O.3g固绿FCF，O.6g变色素2R及0.6g磷钨酸依次加入100 m1双蒸水中溶解，再加入1ml冰醋酸，调节pH值至3.4。（在加入冰醋酸之前，PH值是2.5，我用氢氧化钠调的PH值）
③0.3％冰醋酸溶液，在临用前配制。
1.3染色方法
①切片常规脱蜡至水；
②harris苏木素液染15分钟；
③双蒸水冲洗5分钟；盐酸酒精分化（抽提2次）；反蓝10分钟；
④三色液染60分钟；
⑤0.3％冰醋酸冲洗2次，每次5秒钟；
⑥流水冲洗5—10分钟，至切片组织不脱色为止；（冰醋酸冲洗后即入流水中冲洗至切片组织不脱色为止）
⑦脱水（从95 %酒精开始,数秒钟后即入无水酒精,100%酒精里脱水2分钟）、中性树胶封片。