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奇怪的全阴性

guting2006

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1^# 大中小发表于 2011-11-18 22:27 只看该作者

奇怪的全阴性

今天做了一批片子结果全是阴性，奇怪！起初还以为是DAB的问题，换了新的也没用，接下来想到二抗的问题，可是昨天的结果还好的啊，用的同样的二抗啊，奇怪了！条件都没变过，vim都没出来，奇怪！哦，对了，我今天因为比较忙，所以二抗孵育时间一结束，就洗了泡在PBS里，3个小时左右，再显的色，不过这个应该没有问题啊，而且我后来挑了几张重新上二抗，再显色也没有出来。郁闷中，希望大家帮我找找原因。谢谢

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shanghainese

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2^# 大中小发表于 2011-11-18 22:53 只看该作者

二抗是HRP还是Biotin?
可能泡在PBS里的时间太长了。

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shanghainese

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3^# 大中小发表于 2011-11-18 22:54 只看该作者

重新再做一次。

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guting2006

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4^# 大中小发表于 2011-11-19 08:35 只看该作者

二抗是HRP的，这个也有关系的？嗯，再试试吧，谢谢

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xkj2797xkj

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5^# 大中小发表于 2011-11-19 10:59 只看该作者

PBS里泡太长了这个可能性不大！

（本观点纯属本人意见！仅供参考！）

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shanghainese

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6^# 大中小发表于 2011-11-20 01:29 只看该作者

引用:

原帖由 guting2006 于 2011-11-19 08:35 发表
二抗是HRP的，这个也有关系的？嗯，再试试吧，谢谢

以后不要在PBS里泡得太久了。

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llj19971997

家有一女

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7^# 大中小发表于 2011-11-20 15:44 只看该作者

请问H2O2的浓度是多少？3%还是0.3%？时间是多少？

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guting2006

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8^# 大中小发表于 2011-11-20 19:53 只看该作者

是啊，但是我后来又从里面挑了几张重新上二抗，再显色也没有出来啊。感觉奇怪，我们用的是DAKO的显色剂，一个小瓶一个大瓶，不知道浓度，

，而且还特意再加点H2O2，换新的DAB也不行，时间绝对够久

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xkj2797xkj

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9^# 大中小发表于 2011-11-21 21:26 只看该作者

引用:

原帖由 llj19971997 于 2011-11-20 15:44 发表
请问H2O2的浓度是多少？3%还是0.3%？时间是多少？

是3%！10分钟左右即可！

（本观点纯属本人意见！仅供参考！）

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王华

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10^# 大中小发表于 2011-11-21 21:42 只看该作者

有没有可能是PBS泡得太久，二抗结合的HRP解离了，与二抗分开了，所以DAB显色不了？而二抗还与一抗结合住，所以再上二抗也没有效果。

呵呵......纯属猜测，没有确切理论依据哦！提出来只是让大家拓宽一下思路而已啦！

PBS泡了三个小时怎么说都是有影响的啦！只是很难弄清楚影响的是哪一个环节，离子、分子的世界看不见摸不着的！

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