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求教 Ki-67老是做不出来别的都做的很好

samchen6073@sin

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1^# 大中小发表于 2012-2-16 19:18 只看该作者

求教 Ki-67老是做不出来别的都做的很好

步骤如下: 烤片 1小时 70° ，
               3缸二甲苯每缸5分钟
            然后过酒精  自来水冲洗
            抗原修复  高压修复冒气计时 2分半  自然冷却
            PBS 3次 3分钟/次
               然后加一抗  放4°冰箱
            下午2点半把标本放37°恒温箱 45分钟
               PBS冲洗3次二抗室温 20分钟
               PBS冲洗3次 DAB显色 3分钟  复染

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格言

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2^# 大中小发表于 2012-2-16 23:12 只看该作者

一抗37℃一小时，或4℃过夜。

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shanghainese

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3^# 大中小发表于 2012-2-16 23:12 只看该作者

哪家公司？
哪个克隆？
抗体浓度是多少？

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samchen6073@sin

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4^# 大中小发表于 2012-2-16 23:33 只看该作者

迈新的单克隆抗体是即用型的

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flyaqmt

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5^# 大中小发表于 2012-2-17 10:02 只看该作者

高压修复是用的PH9.0的EDTA吗？为什么放4度冰箱呢，我们现在是室温，因室温只有20度，在中午的时候放37度温箱90分钟，二抗也是37度温箱30分分钟。

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格言

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6^# 大中小发表于 2012-2-17 10:13 只看该作者

回复 4# 的帖子

我们也是用迈新公司的，单克隆，浓缩抗体，一直以来都挺稳定的。没有发现什么异常。

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shanghainese

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7^# 大中小发表于 2012-2-17 12:00 只看该作者

引用:

原帖由 samchen6073@sin 于 2012-2-16 23:33 发表
迈新的单克隆抗体是即用型的

请您看看您用的抗体是哪个克隆名。

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天涯无风

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8^# 大中小发表于 2012-2-22 18:23 只看该作者

KI-67有些克隆号的抗体很难做出来，最好用edta修复，并且延长孵育时间，否则阳性率很低，甚至全阴性

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悠悠我心

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9^# 大中小发表于 2012-2-23 19:14 只看该作者

我科用上海长岛的即用型，效果不错，PH9.0的EDTA煮沸修复，一抗4度冰箱过夜或37度烤箱2-3小时都可以。

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无聊的雪

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10^# 大中小发表于 2012-3-18 22:58 只看该作者

67是有点麻烦，

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求教 Ki-67老是做不出来 别的都做的很好

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