xiaoniou777

请教丁老师，如果阴性片要重加别的抗体，具体应怎么操作呢？能不能告诉我们详细的步骤？还有这样的话应该怎么收费呢？

dingwei

去掉玻片，用二甲苯洗去树胶，然后用酒精去二甲苯，水洗，加一抗、二抗、显色就行。
如果你觉得他的抗原修复没做好，也可以重新修复。
至于收费，应该是一样的。

xiaoniou777

谢谢丁老师！下次我可以试试啦。

天涯无风

引用:

原帖由 dingwei 于 2011-8-20 15:55 发表
出现白点的片子重做还是不着色。

很有可能是苏木素复染了以后抗原位点被覆盖了，造成阴性。

dingwei

引用:

原帖由 天涯无风 于 2011-9-5 12:48 发表
很有可能是苏木素复染了以后抗原位点被覆盖了，造成阴性。

苏木素不会把浆着色的位点覆盖，那怕就是有，也不会是全部。

王华

我认为可能是脱蜡后过酒精速度过快或是最后一缸酒精含有少量二甲苯导致的二甲苯（或其他脱蜡剂）残留所致，脱蜡剂是脂溶性的，入水后就在组织中局部聚集，因为表面张力的原因，聚集的脱蜡剂呈类圆形，凡是残留有脱蜡剂的地方，抗体是结合不上，最后呈局部阴性表现。再加抗体也不能结合。
   这样的状态是很难重复的，因为下一次做，酒精有可能换成新的了，或者过酒精的时间也有了小的变化。
   我也遇到过这样的片子，很认真的比较了蜡残留（多与少）、二甲苯残留、抗体残留等原因引起的不同表现，认真的思考寻找引起不同表象的分子层面的解释。
   所以最后做片子时，要做到定期更换新二甲苯和酒精，特别是酒精要勤换。如果是研究生帮做片，就规定好脱蜡脱二甲苯每缸的时间，严格执行就好了！
   个人观点哦！多多指教哦！

王华

回来又考虑了一下，如果在修复前有物质（如脱蜡剂或其他脂溶性物质）残留在阴性的部位，高温修复时会阻碍修复的反应，造成局部“未修复”的状态，就算修复后用甲醇阻断时将脂溶性的物质溶解了，抗原位点也不能暴露，抗体都是不能结合上去的。
    有个建议：找回那张片子，彻底脱胶后，无水酒精、95%酒精浸泡10分钟后水洗，重新修复、加抗体再做一次看看能不能将阴性的部位做出来。
    呵呵.......能找回那张切片吗？

王华

重点是酒精充分浸泡，重新修复一次！

王华

如有可能，还要问问原出片单位，他们用的组织透明剂是什么，丁老师您用的脱蜡剂是什么，两种溶剂是否互溶？
如果他们的透明剂与您的脱蜡剂不互溶，透明剂残留，用不互溶的脱蜡剂是不能去除的。
（因为我们科用的一种环保透明剂与二甲苯是不互溶的，至于其他的脱蜡透明剂之间是否互溶就不知道啦，如今环保透明脱蜡剂种类蛮多的，所以也请丁老师注意一下！）

[ 本帖最后由 王华 于 2011-9-19 19:00 编辑 ]

dingwei

第二次做就是酒精充分浸泡，重新修复，重加抗体，依然不着色。
脱蜡剂是大家都是用的是二甲苯。如果“脱蜡剂不互溶，透明剂残留，用不互溶的脱蜡剂是不能去除”，应该不只是二个小点不着色，应该是多个点甚至可能有片状、条索状出现，不过这个问题值得注意。