五、苏木精染液常见问题的原因分析及解决方法
1、苏木精染液表面“氧化膜”与沉淀的形成
苏木精染液表面的氧化苏木精与空气中的氧气接触而进一步氧化,氧化苏木精3位羟基被氧化成羰基,羰基氧原子的孤对电子充分暴露在外,更容易进入Al3+++ 的杂化空轨道形成配位键,使过氧化物形成聚合物。苏木素染液表层过氧化物氧聚合物成片层样,形成“氧化膜”,溶液内部的过氧化物聚合物形成沉淀。
解决办法:
(1)、避免氧化反应过度引起过氧化苏木精增多。
(2)染液加入丙三醇:丙三醇俗称甘油,丙三醇1、2、3位均连有一个羟基(极性基团),羟基中的H原子带部分正电荷,与氧化苏木精分子中的羟基上的O原子(带部分正电荷)形成氢键。丙三醇分子占据了氧化苏木精的羟基旁的位置形成“空间阻隔效应”,有效阻断了Al3+++ 与O原子形成配位键,使氧化苏木精分子不能聚合,减少了沉淀和“氧化膜”的产生。
2、苏木精染液染色能力下降过快。
苏木精染液染色能力下降的原因:
(1)苏木精染液在使用过程中,因染液中的氧化苏木精浓度逐步降低导致的染色颜色变淡,此属正常现象。
(2)染液中的氧化苏木精进一步被氧化成过氧化物,过失去染色能力。
根据化学反应平衡原理及化学反应速率理论,苏木精染液配制时,反应物浓度逐渐下降,生成物浓度逐渐增加,氧化反应达到了初步的平衡。但在反应体系中依旧存在低浓度未反应的氧化剂离子(Hg+、IO3-等),在染液使用过程中,染液中的氧化剂继续缓慢的进行氧化作用,使染液中的氧化苏木精苏木精进一步被氧化。
染色过程中将自来水带入苏木精染液也是形成过氧化物的重要原因:目前,我国自来水消毒剂常用Cl2 (1L水中通过0.002g Cl2)。Cl2 与水反应生成HClO,ClO-具有很强的氧化能力,将氧化苏木精继续氧化成过氧化苏木精,加速染液“变旧”。
使苏木素染液耐用的方法:
(1)配制过程中氧化剂的使用量要合适:氧化剂的使用量要减少至理论值的1/2量为宜。目前生产苏木素的厂家很多,苏木素的纯度高低不一。需根据苏木素的质量适当调整氧化剂的使用量。 配制结束时染液中依旧存在一定浓度的苏木素未被氧化,以“应付”染液在放置和使用过程中氧化剂的继续氧化反应,尽量减少染液中的过氧化苏木素的生成。
(2)配制过程中对温度和反应时间的控制要合适。HgO的最佳反应温度为90~100℃反应5分钟后快速冷却,NaIO3,KMnO4在室温下(25℃)进行氧化反应,如果温度过高,氧化反应将会过快,苏木素被直接氧化成为过氧化物,导致具有染色能力的氧化苏木素浓度低下,导致染色效果差。
(3)染色过程中减少自来水带入染液。 进入苏木素染液前用蒸馏水洗切片或将自来水尽量甩干再放入染液染色,可有效延长苏木素染液的使用寿命。
在各种病理技术参考书中提到的配制苏木素染液的方法繁多,各个病理科也有根据自己的经验进行改良的方法。其实只要掌握了苏木素氧化的原理,各种氧化剂的氧化能力强弱,无论用何种方法,都能配出好用、耐用的苏木素染液!
个人观点,仅供参考!
[ 本帖最后由 王华 于 2011-11-6 01:59 编辑 ]