luo

究竟为什么高温修复，自然冷却，目的是什么？感觉挺费时间。

shanghainese

您自己可以试一试, 看看快速冷却与自然冷却有什么区别。

luo

今天打电话问了一下公司，说是根据经验的总结，其实我倒是考虑到一点，如果降温剧烈，很容易脱片，不过这个不是主要因素。对回答不是很满意。

luo

自己在某网站上找到了答案：
我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，具体过程如示：上述反应的结果导致许多抗原决定簇被封闭，而加热可以水解该桥连使抗原被激活。如果骤然冷却可能会使已经水解的桥连重新发生。这样就无法达到修复的目的。

luo

不可将切片从缓冲液中取出冷却，避免蛋白恢复至原有的空间构型

shanghainese

引用:

原帖由 luo 于 2010-9-11 09:22 发表
自己在某网站上找到了答案：
我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，具体过程如示：上述反应的结果导致许多抗原决定簇被封闭，而加热可以水解该桥连使抗原被激活。 ...

即使是经过了抗原修复,epitope 不一定能全部暴露出来。抗原修复只能让部分epitope 暴露出，使小部分抗体与石蜡切片反应。
所以还有许许多多的抗体目前还不能用在福尔马林固定的石蜡切片上。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2010-9-12 00:13 编辑 ]

luo

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-9-11 11:30 发表 即使是经过了抗原修复,epitope 不一定能全部暴露出来。抗原修复只能让部分epitope 暴露出，它只能让小部分抗体与石蜡切片反应。所以还有徐许多独的抗体目前还不能用在福尔马林固定的石蜡切片上。

明白了，谢谢了。

dky10

原来如此

gao314159

受教了

dingwei

引用:

原帖由 luo 于 2010-9-11 09:22 发表
自己在某网站上找到了答案：
我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，具体过程如示：上述反应的结果导致许多抗原决定簇被封闭，而加热可以水解该桥连使抗原被激活。 ...

骤然冷可能会使已经水解的桥连重新发生，好象没有理论根据，如果真有重新连接的话，也可能倒过来才对，就象DNA解链。自然冷却与骤冷只是加热时间上的差异。这就是说，自然冷却的加热时间可以短一点，因为在自然冷却过程中，组织继续维持在高温下很长时间。而骤冷方式，加热时间长一点，这也就是高压加热时间有人说2分钟，有人说3分钟的原因吧。