dingwei

santacruze的一抗，是科研性的抗体，有的很不成熟，背景深、无选择性着色或根本不着色常常发生。
博士德的二抗试剂盒属生物素检测系统，建议更换非生物素试剂盒。福建迈新的即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒  或者 中杉的小鼠超敏二步法免疫组化检测试剂等都成。

bagelo

用DAKO的Envision的二抗试试，用生物素放大系统容易有背景。

shanghainese

引用:

原帖由 么么么么 于 2010-2-23 21:10 发表
老师，我用小鼠的一抗做大鼠组织是不是原则性错误了？？   我的片子都是一片黄，阴性对照和阳性片结果一样这种情况的原因是不是可能就是这个？

我搜到GBI公司的超灵敏多聚HRP/AP免疫组化检测试剂盒http://www.g ...

能否告诉我您用的是哪几个一抗?

么么么么

老师好！我用的santacruze的Epac 小鼠抗大鼠、小鼠、人的单克隆IgG。我的组织是大鼠肝脏。我昨天做了大鼠骨骼肌的 和人 胃黏膜的组织，感觉挺清爽的。  我同学的指标也是做大鼠肝脏，但用的是santacruze的兔抗，没有生物物阻断，染色效果还不错。。

么么么么

引用:

原帖由 dingwei 于 2010-2-24 08:06 发表
santacruze的一抗，是科研性的抗体，有的很不成熟，背景深、无选择性着色或根本不着色常常发生。
博士德的二抗试剂盒属生物素检测系统，建议更换非生物素试剂盒。福建迈新的即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒 ...

丁老师：据说GBI的快速二步法专门针对小鼠抗大鼠易产生的交叉反应。真的有这么神奇吗

么么么么

版主老师、丁老师好。
我后来买了迈新的生物素阻断试剂盒，换了二抗，用PV二步法。结果如下：
1、SABC染色，博士德羊抗小鼠二抗，增加内源性生物素阻断步骤，用PBS代替一抗的阴性对照，结果还是整片黄。
2、PV二步法：阴性对照无着色。阳性片子的结果是肝细胞着色，每个肝细胞都有着色。  有人说一般阳性细胞都是散在 或者一片片的，不会一个镜头下每个细胞都着色。我的指标倒是定位于肝细胞的。
请问老师我现在PV二步法做出来的像是真阳性吗？

shanghainese

内源性生物素可能还没有阻断

么么么么

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-3-8 13:16 发表
内源性生物素可能还没有阻断

老师，PV二步法的二抗是HRP结合的，内源性生物素不是没有影响的吗？

dingwei

肝细胞的抗原在肝细胞几乎都着色，不一定是内源性生物素；如果用非生物素试剂盒，那着色肯定不是内源性生物素。当抗体浓度过高时，肝细胞也会出现非特异性着色。如果除肝细胞外细胞都不着色，一般来说，就是阳性细胞。

么么么么

谢谢丁老师噢噢噢   谢谢版主老师噢噢哦