啾啾小鱼

请教各位高手为什么我们做的ki-67阳性率很低,步骤是按常规方法做的,很少有阳性.
另双氧那步我们用的是过氧化氢液体,修复是用微波,不知道有没有什么影响.急!!!!
同期做的其他几项该是阳性的都出来了.

dingwei

应该是修复时间和温度不够, 可用高压法试一下.

shanghainese

引用:

原帖由 啾啾小鱼 于 2009-1-20 21:12 发表
请教各位高手为什么我们做的ki-67阳性率很低,步骤是按常规方法做的,很少有阳性.
另双氧那步我们用的是过氧化氢液体,修复是用微波,不知道有没有什么影响.急!!!!
同期做的其他几项该是阳性的都出来了.

您用的是哪个克隆？

啾啾小鱼

谢谢！可是同期修复的其他几项没有事。修复时间不都是一样的吗？
试剂克隆号好像是mib-1的，不知道有没有问题呢？急切等待！！谢谢@

shanghainese

引用:

原帖由 啾啾小鱼 于 2009-1-22 19:50 发表
谢谢！可是同期修复的其他几项没有事。修复时间不都是一样的吗？
试剂克隆号好像是mib-1的，不知道有没有问题呢？急切等待！！谢谢@

MIB-1这个克隆应该没有问题。但是抗体保存不好，或制片不好（例如，固定时间过长，温度过高，组织自溶坏死等等）都可引起假阴性。

adriana

修复液的ph怎么样？还有试剂推荐的修复方式。。。

120058210

也请教各位高手，我做的ki-67阳性率这段时间也很低,步骤也是按常规方法做的,原来也是这样做的阳性率可以。最近，不知什么原因，换了几家的试剂，阳性率都是很低，很少有阳性.。其它标记都没有类似情况。
我们修复是用高压锅柠檬酸（保温180度，2分钟半至3分钟，冷却20分钟左右），我想是不是可以延长修复时间，或者提高一下PBS的温度？

dingwei

你是不是用电磁炉了？高压锅内有没有放烧杯？

120058210

谢谢！就是用的电磁炉，片子少的时候常在高压锅内加水，水开后放盛柠檬酸的塑料缸，沸腾后再放片。然后，就是上面说的那些了。