刚开始做免疫组化加PAS双染,但是却不尽人意,始终没有结果,我把步骤写在这边,希望高手指点迷津
切片脱蜡至水 二甲苯一10min,二甲苯二10min,100%酒精5min,90%酒精5min,80%酒精5min,70%酒精5min,两道蒸馏水各三分钟,
免疫组化步骤按北京中山金桥pv8000说明
1、脱蜡、水化组织切片。
2、根据所应用的一抗的特殊要求,对组织切片进行预处理。
3、3% H2O2去离子水孵育5分钟,以阻断内源性过氧化物酶,PBS或TBS冲洗。
4、滴加一抗,室温或37℃孵育30~60分钟,或4℃过夜,PBS或TBS冲洗,2分钟×3。
5、滴加通用型IgG抗体(Fab段)-HRP多聚体,室温或37℃孵育30分钟,PBS或TBS冲洗,2分钟×3。
6、应用DAB溶液显色。
7、显色后
高碘酸溶液10min
蒸馏水充分漂洗3min*2
希夫试剂,避光室温,15min
流水冲5min,
苏木精复染
梯度乙醇脱水
二甲苯透明.树脂封片
这么做就是染不上颜色,免疫组化还勉强有点棕色但切片中间没棕色反应物,pas压根就一点没红色,大虾们看看我哪里出问题了
Schiff试剂(配制20m1):
称取碱性品红0.1g,烧杯内放入20ml蒸馏水,煮沸,将0.lg碱性品红慢慢到人沸水中,边放边搅,至完全溶解。待温度降至60~70℃时过滤至锥形瓶中,加2ml1NHCl于瓶中,摇匀。加入Na2SO3 0.2g于瓶中,塞紧瓶口,摇荡至完全溶解,用黑纸将瓶包严置阴暗处过夜。次日加100mg活性炭于瓶中,摇匀后迅速过滤于棕色瓶内。保存于4℃冰箱中备用
先在这里谢谢了
现在我买上sigma的Schiff试剂了,只做pas染色,但是还是没什么效果,还请高手帮忙看看是哪里出问题了,我的脱蜡至水有问题吗还是什么,我已经做了还多次了但结果不尽人意啊,谢谢了!