sixflag123

没遇见过

[ 本帖最后由 sixflag123 于 2008-2-28 13:02 编辑 ]

bagelo

细胞的组化一定不要让片子干了，放在湿盒里做，抗体可以多加一些，另外可以试试两步法的试剂盒，有生物素放大的Kit就容易有背景，显色的时间也不好控制，经常滴上DAB就一下子都有颜色了。
细胞涂片制备好的片子，固定之后可以放在－20或－30度保存，但是一个月之后阳性结果的强度会明显降低，我没再试过－80保存，或者更长时间的保存结果会怎样。建议不要保存太长时间。

hedongcao

版主是上海的不?我马上要做实验了,请多指教啊.......

kuosheng_ksia

求教: 我做细胞爬片,常温下用4%多聚甲醛固定10min,之后用S-P超敏试剂盒进行抗原检测,请问版主,细胞化学中多聚甲醛固定后可否省去抗原修复?

kuosheng_ksia

补充一点:我是用盖玻片(6孔板)做爬片,固定后用中性树胶将盖玻片粘在载波片上,然后放在染色架上进行高温高压修复,高压后发现盖玻片全掉修复液里了,前功尽弃啊.

如果必须进行修复,有没办法不"掉片"?急需帮助

shanghainese

引用:

原帖由 hedongcao 于 2008-3-6 17:10 发表
版主是上海的不?我马上要做实验了,请多指教啊.......

版主是上海人。

shanghainese

引用:

原帖由 kuosheng_ksia 于 2008-3-6 19:48 发表
求教: 我做细胞爬片,常温下用4%多聚甲醛固定10min,之后用S-P超敏试剂盒进行抗原检测,请问版主,细胞化学中多聚甲醛固定后可否省去抗原修复?

是否省去抗原修复要根据一抗而定。
有些一抗需要抗原修复， 有些一抗不需要抗原修复。

shanghainese

引用:

原帖由 kuosheng_ksia 于 2008-3-6 20:02 发表
补充一点:我是用盖玻片(6孔板)做爬片,固定后用中性树胶将盖玻片粘在载波片上,然后放在染色架上进行高温高压修复,高压后发现盖玻片全掉修复液里了,前功尽弃啊.

如果必须进行修复,有没办法不"掉片"?急需帮助

用这种片子，但比较贵。
http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=364812

shanghainese

kuosheng_ksia， 你为何要用4%多聚甲醛固定，而不用丙酮固定？

bagelo

可以用酶修复啊，胰酶和胃酶都可以。细胞爬片不象石蜡片，石蜡片在制片的过程中对抗原有一定的影响，需要通过修复充分暴露抗原，细胞爬片不用那么剧烈的热修复，你试试酶修复吧。如果是丙酮固定则不需要修复，甲醛和多聚甲醛固定后会有抗原发生耦联，会影部分响抗原抗体结合