celaders

大家好，我的实验中会用到辣根过氧化物酶HRP，用它来验证神经的愈合情况，我现在只知道基本原理，就是将HRP注射到靶肌肉上，然后到脊髓切片观察，但是具体的都不清楚，请问有做过的高手，HRP的注射浓度，多长时间后取材，脊髓的取材固定方法，切片厚度，免疫组化染色方法等具体的步骤，以及相关问题。谢谢大家了！

ylzhao

[这个贴子最后由ylzhao在 2004/11/20 04:06pm 编辑]

这两篇文章有相关信息
周围神经端侧吻合再生的研究进展
... 并对吻合角度进行了研究。实验结果显示：45度角吻合组的神经再生及靶肌肉获得的
神经再支配 ... 55%～70%，是端端吻合组的76%～80%，认为端侧吻合在临床上具有可行性。
1999年韦兆祥等［8］用辣根过氧化物酶(HRP)追踪法比较大鼠腓 ...
www.guwaike.com/de/de019.htm - 12k - 网页快照 - 类似网页
用电解损毁方法制备大鼠的脊髓损伤模型
... 创面撒少量青霉素粉，逐层缝合肌肉与皮肤 ... 行于同侧脊髓前索。
如果脊髓皮质脊髓束纤维受损，使轴浆流中断，HRP就不能从末梢运输到胞体，
也就无法使大脑运动皮层处的锥体细胞产生标记 ... 神经解剖学和传导束路追踪. ...
www.guwaike.com/e/e210.htm - 23k - 网页快照 - 类似网页
用微量注射器向腰膨大注入400 g．L－1的HRP 4～5μl，速度0.5μl．min－1，留针15min，分层缝合切口（预实验证实这一过程不会引起大鼠运动功能改变）。术后第3天，在深麻下，用40g．L－1多聚甲醛，体积分数为2.5％的戊二醛液做心内灌流固定。随后立即取脑，在同种固定液中重固定2h。根据Donoghue的定位图，支配后肢的皮质脊髓束胞体在前囟前后的体感运动皮层处分布较集中，取前囟前后脑组织做连续冰冻切片，片厚50μm，用TMB法孵育显色［8］。每只大鼠取9张脑片，镜下计数标记神经元总数。