dingwei

                      HP（硝酸银法）
试剂配制：
（一）醋酸缓冲贮备液，PH3.6
     0.2N醋酸缓冲液，PH3.6             10 ml
     蒸馏水                            240 ml
     以下各液均用此液配制
（二）1 %硝酸银液
    硝酸银                            1 g
    醋酸缓冲贮备液，PH3.6             100 ml  
（三）2 %硝酸银液
    硝酸银                            0.2 g
    醋酸缓冲贮备液，PH3.6              10 ml
（四）5 %明胶液
    明胶                             5 g
    醋酸缓冲贮备液，PH3.6             100 ml
    先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅
    拌。
（五）3 %对苯二酚液
    对苯二酚                         0.3 g
    醋酸缓冲贮备液，PH3.6             10 ml
（六）明胶对苯二酚液
   3 %对苯二酚液                    1 ml
   5 %明胶液                       15 ml
（七）显影液
   明胶对苯二酚液                  16 ml
2 %硝酸银液                     3 ml
      在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用。
操作方法：
1、组织脱蜡至蒸馏水
2、醋酸缓冲贮备液洗2次
3、入1 %硝酸银液中，56℃，1小时
4、切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止。
5、倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟
6、水洗
7、脱水，透明，封固。
结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。

chenrong

作的时后蛮麻烦的! 我想问下面HID的问题,<因锁了>可不可以第8不作? :em17: :em17:

阳春白雪

呵呵
这种方法 好是好，但是不容易控制，银染要求高，如果没有经验很容易失败
我开始就是用这种方法染HP但是效果均不理想，估计是污染造成的。
大家可以试用甲苯胺蓝染色 染色
滴染20分钟，然后水洗1分钟95%酒精分化数秒
然后从80%-100%酒精足级褪色，二甲苯透明
中型树胶固封。
结果：在腺腔内可见幽门螺杆菌（高倍镜）
很清晰哦仔细看很容易发现。
这种染色方法简单快洁，不需要恒温水箱等设备，只要医院有胃镜都可以做
大家不防试试，甲苯胺蓝浓度我暂且不说，大家可以回去试着配。
呵呵 我就是试着陪出合适浓度的。

阳春白雪

有人试吗？
明天公布浓度哈

wzqyqp

如何配？

ylzhao

[这个贴子最后由ylzhao在 2004/10/12 11:23pm 编辑]

丁老师贴出来的方法确实很可靠，细菌染的很清楚。是染HP的一个经典方法。曾经在这个栏目里见过美蓝法。有关HP染色我做过一点工作，唯独没有做过硝酸银法。我认为Giemsa和美蓝染HP不理想。染色过程中容易脱色，容易出现假阴性。染出的细菌颜色较淡。硝酸银法不会出现此问题。甲苯胺蓝法是一种简便可靠的方法。可以和硝酸银法媲美。
Giemsa，美蓝，甲苯胺蓝。这三方法应该说甲苯胺蓝法最可靠。一般不会出现假阴性或细菌颜色较淡，光镜10X40倍就很清楚。

ylzhao

[这个贴子最后由ylzhao在 2004/10/10 09:03pm 编辑]

甲苯胺蓝HP染色法
液体：
甲苯胺蓝贮存液
甲苯胺蓝                 0.1g
磷酸缓冲液 pH6.8         100ml
甲苯胺蓝工作液：
甲苯胺蓝贮存液            1份
蒸馏水                    9份
切片
10%福尔马林固定，石蜡切片4微米。
方法：
1. 切片脱蜡至酒精。
2. 蒸馏水冲洗。
3. 甲苯胺蓝工作液10min
4. 蒸馏水洗
5. 脱水、透明、中性树胶封固。
结果：HP-深蓝色，核深蓝色，背景淡蓝色。
注：薄切片细菌显示的最好。为了得到理想的结果可以调整工作液的稀释度或者调整染色时间。