taofseu

各位老师好，我现在做大鼠变应性鼻炎模型鼻粘膜中蛋白A的免疫组化，想看看正常组和患病组有无差别。现在国内外没有找到别人报道过，由于经费不够，所以没有没有用ELISA，预实验发现正常组和患病组都有着色（EnVision二步法），问题是：
1、阳性对照和阴性对照都需要做吗？（阳性对照是鉴别假阴性的是吧？既然两组全有表达，是不是阳性对照就不要了？）如果需要，该怎么  设计对照？
2、结果我需要取五个视野，数阳性细胞个数进行统计分析，由于蛋白A可能在多种细胞中表达，那到时候我是不是要分类计数阳性细胞？听说图像分析系统可以进行免疫组化结果统计分析（好像是什么灰度值），不知道南京地区有没有
学生初次做免疫组化，很多不是很懂，恳请各位老师的指点，学生先谢了

shanghainese

1、阳性对照和阴性对照都需要做.不然怎样鉴别真阳性,假阳性, 和真阴性,假阴性?
2、白A可能在多种细胞中表达, 但是您需要找的是什么细胞? 各个细胞之间的关系? 蛋白A的生物功能等等都是您可以研究的对象.图像分析系统可以进行免疫组化结果统计分析（好像是什么灰度值），但这只是一组参数.南京地区有没有我就不知道了. 因为我不在南京工作.

taofseu

感谢您的回复，快一年过去了，再次回来甚是亲切，实验已经差不多搞定，正处结果统计时，免疫组化结果可以用IPP分析，详细情况可以见丁香园中相关帖，内容比较多，需耐心学习，祝大家实验顺利

alamisi

hehe  和我现在遇到的问题好像啊 不知楼主怎么解决的啊 我也是 做的分子没有人做过的 而且也是在我认为的阴性组中也有表达 强度还差不多  求教啊  谢啦

鱼越龙门

taofseu你好:能说的具体些么?我也遇见同样问题,不知能否提供,可用于细胞计数及灰度分析软件下载网址,