watin

本人初做冰冻切片，因课题要做激光显微捕获切割Laser capture microdissection，在做冰冻切片时如到了以下问题，希望同行帮忙。
1.我用mayer's液染色后，1%的盐酸酒精分化后，立即拿到镜下看，效果挺好，可是当我用梯度酒精和二甲苯脱水后，拿到镜下再看时，明显地看到由蓝变黑，这是什么原因呢？我没有用伊红。是不是苏木素的染色时间长了？
2.当我加上伊红后，红色几乎把蓝色掩盖了？伊红染完，是否得用自来水冲？我用的是酒精溶性的伊红。
3.镜下组织的结构不清，乱糟糟的，就是横一道竖一道，（唉，新手，还没发过2片贴子，不让上传图片。一定争取尽快达到标准。）是不是与标本的保存有关？是不是产生冰晶了？我从手术室切下的胃癌取下标本后，直接放入-80度冰箱保存。
我的染色步骤：
100%酒精 15秒
95%酒精 15秒
70%酒精 15秒
去离子水 15秒
mayer's液 30秒
自来水   30秒左右
1%的盐酸酒精 20秒
自来水   30秒左右
70%酒精 15秒
伊红    蘸一下即拿出
自来水   20秒左右
70%酒精 15秒
95%酒精 30秒
100%酒精 1分
二甲苯   2分

dingwei

1、用梯度酒精和二甲苯脱水后，拿到镜下再看时，明显地看到由蓝变黑，是因为二甲苯挥发了，有水就不会这样。
2、伊红染完，可用自来水冲洗，也可直接进入梯度酒精。
3、冰冻切片没做好，没及时固定或有冰晶。