TPA涂抹小鼠皮肤后 做冰冻切片 染炎性细胞 非常郁闷中
TPA涂抹后24h取材,立即用OCT包埋,冰冻切片,刀头零下40度,机箱零下20度,切4微米-8微米都试过,
切完晾15分钟或不晾,冷丙酮固定10分钟,室温或37度晾4小时至过夜都试过,
PBS5*2
H2O2 3% 10分钟
PBS 5*3
二抗血清 1:50 半小时
一抗 CD11B(染巨噬细胞);GR1(染中性粒细胞)1:50;1:100;1:150都试过
PBS 5*3
二抗(兔抗大鼠IgG) 1:200
PBS 5*3
三抗(avidin) 1:200
PBS 5*3
DAB 显色
结果:在十一之前做过,片子形态尚好,很清晰,只是有些非特异.
节后用了各种条件,片子脱的很厉害,形态差,阳性也似乎没有或
很弱,不知是不是温度影响很大.物理特性所致?从37度到室温
的影响,还是什么原因,请高手指点,不胜感激.
荧光的也做了,效果不好.