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培养的细胞如何做免疫组化

培养的细胞如何做免疫组化

大家好!我想请教大家一个问题:关于培养的细胞如何做免疫组化.具体操作流程怎么样,同时有什么注意事项.先谢谢大家了!

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我也是同样的问题

1.PFA固定多久?常温还是在冰上?
2. 用什么方法破壁?如果用TRITONX100要多久?
3.最后用PBS 冲洗后可以用蒸馏水冲洗吗?
4.我是用盖玻璃片培养细胞的,最后片子捞出来后,是晾干后封在玻璃片上,还是湿封?

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有没有哪位老师知道,请赐教!

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没有做过,请教一下:shanghainese 老师,他是行家.
贺兰山踏不破,雪花儿融不了。

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谢谢白雪! 。同时我建议大家如果有关于技术方面的信息希望大家能在上面一起共享。谢谢!

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请搜索一下 “爬片”就有您所想要的资料。

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做细胞培养的组化有两种情况:
一是悬浮细胞培养后如果想做免疫组化,就要把细胞甩在载玻片上,(专门有这种甩片用的离心机)晾干之后固定,其中固定液可以用PFA,或者丙酮,固定在室温或者4度都可以,10~15分钟。之后就可以按照常规组化染色的程序进行下面的实验了。需要注意的是:甩片之前要用PBS把细胞洗两次,然后记一下细胞数,可以试几个细胞浓度,在镜下观察,以单层平铺细胞为宜。找到合适的浓度后再制备实验用的甩片样品。
二是贴壁细胞需要做免疫组化时,可以在培养皿里放入盖玻片,让细胞长在上面后,在取出来进行实验。需要注意的是:取出培养好细胞的盖玻片后,PBS洗两次后,室温晾干用PFA或丙酮室温或4度固定都可以,10~15分钟。之后可按组化常规方法进行。封片时将有细胞的面向下盖在载玻片上即可。
另外,用丙酮固定细胞的同时即对细胞膜进行了打孔的步骤,如果用PFA进行固定,则需要再使用打孔剂打孔(细胞内表达)。使用过氧化氢去除内源性过氧化物酶时,细胞要比石蜡切片的组织反应强烈,偶尔会掉片。
认真做事,踏实做人!fighting!!

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细胞片捞出后常规脱水,二甲苯透明,树胶封片,我觉得还是湿封好吧!
认真做事,踏实做人!fighting!!

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细胞免疫组化  可不可以用95%乙醇

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大家好,想请教那位老师 组织染色老是水脱不干净 怎么回事,谢谢大家请赐教

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