feather

   我想请教各位老师几个问题：
1、我的切片在进行热修复时总是脱片；（玻片经过多聚赖氨酸处理过，切片厚度为4-5μm，取材部位为跟骨与跟腱的交界处）如果不进行热修复应该用别的什么方法处理呢？
2、在做HSP70（ABC法）时出现阴性对照阳性染色；（Ⅰ抗的稀释浓度为1：100，试剂盒由北京中山公司提供）
3、如果要用免疫组化方法做毛细血管标定，现在都有什么标定物可供选择？用什么标定物最好呢？
   我现在实验进行不下去，非常着急。请各位老师多多指点，谢谢！！

dingwei

1、你的组织本身就容易掉片。
2、改用APES胶试一下。
3、用什么修复方法主要是根据你用的抗体。很多抗体并不需要高温修复，只要用酶就可以了。
4、HSP70这抗体特异性不高。做这抗体并没什么实际意义，方献上很多文章都有是有点“JIA”
5、毛细血管标定你还可以试一下：CD31  CD34  8因子等等

feather

谢谢丁老师。
我用的抗体是NOS（博士德公司），并且准备做CD34或CD31，不知道用什么修复方法最好？不用热修复方法可以吗？
您所说的三种标定物那种更稳定一些啊？

dingwei

你可以让博士德公司先给你试一下。把你的标本给他。

feather

Thanks!!

zhoutao

如果老掉片的话，还可以从以下几个方面找找原因：
1.上胶前玻片是否清洗干净了
2.切片是否切地太厚了，一般不要超过4微米。
3.烤片的温度及时间是否控制得当。60度，两小时比较合适。
4.蜡块的前处理，如组织脱水等过程处理不当的话也有可能导致掉片。

feather

谢谢ZHOU老师！

shanghainese

引用:

下面引用由dingwei在 2004/06/14 10:23pm 发表的内容：
你可以让博士德公司先给你试一下。把你的标本给他。

好主意。

zhoutao

博士德应该有自己的实验室，他们应该会提供外检服务。

huizhou

请教楼主：
我正在做皮肤HSP70（ABC法）的染色。用冰冻切片染效果还可以但是组织结构不理想，用石蜡切片染（同样的步骤），没有反应，热修复也没有作用。而且经过热修复以后的组织，结构完全被破坏。
请问有什么建议。
谢谢