lihua328

谢谢 fangdang和可乐猫啦：）

有的书上又说要用丙酮4度固定10分钟，不知道有什么不同？
今天我做的时候直接从冰箱拿出来就用pbs洗，结果脱片很厉害，原来之前要风干，呵呵！这风干不知又有什么时间限制没有？请教各位啦！
再次感谢！

可乐猫

在贴片之前还要涂明胶呢，不然也会掉片的。滴加抗体之前必需要风干的。

lihua328

但是我的玻片是经过多聚赖氨酸处理过的啊，不用涂明胶了吧

shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/07 10:40pm 发表的内容：
我是先用多聚甲醛固定再用蔗糖脱水，然后再实行冰冻切片啊
我的意思是是不是切完片后还要用比如丙酮等固定：）

lihua328：
您的组织经过以上处理应该做漂片(floating section),而不是普通的冰冻切片，所以不需要丙酮4度固定和风干等等。切片在组化染色过程中始终是在浸染状态。染后一般不需苏木素套色复染。您可多看一点脑免疫组化文章，大部分用的是这种方法。

lihua328

非常谢谢shanghainese！
难怪我也听一位老师说：他采用普通的冰冻切片做了很久都没做出来，后来用漂片法就做出来啦！
是不是我用这种方法一定要用漂片法啊？用普通的冰冻切片能否有可能做出来呢？
今天我试了几片染色效果不理想，我还怀疑是不是我灭活的时候用的是0.5％的H2O2甲醇溶液不行，我还打算再用3％的试试看。
请shanghainese 赐教！！万分感谢！！！

lihua328

查了一些文献，发现大家在用漂片法时，好像没有经过加正常山羊血清封闭，是不是不用啊？还有就是用漂片法是不是一抗的稀释程度要大很多啊，好像都是1：1000什么的，这样能不能做出来呢？
谢谢！！！！

shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/09 11:54am 发表的内容：
非常谢谢shanghainese！
难怪我也听一位老师说：他采用普通的冰冻切片做了很久都没做出来，后来用漂片法就做出来啦！
是不是我用这种方法一定要用漂片法啊？用普通的冰冻切片能否有可能做出来呢？
今天我试了几　...

关于是否一定要用漂片法，要由您自己决定。漂片法是脑神经组织学领域里经典的方法。由于神经细胞体积大，一般冰冻和石蜡切片(5微米)不能观察到细胞的整体。而漂片的厚度在20至40微米，适宜观察神经细胞，这是其一。其次，您要用一般冰冻和石蜡切片法也行，但形态，观感和染色结果都可能与漂片不一样。将来您的文章要发表，审稿关能否通过呢？希望您能考虑这些问题。
至於一抗的浓度，可以参考厂商的说明书。您也可以摸几个不同的浓度。
另外，不是任何抗体都能做免疫组化的。用抗体之前除了多看文献，还要向厂商多了解抗体具体使用情况。

lihua328

非常感谢 shanghainese 前辈！