raccoon

先微波再胰蛋白酶修复与先胰蛋白酶再微波修复有什么不同？有必要用两种修复方法吗？

fangdang

其实我几乎没做过同时多步修复的.是否会增加背景,或者说是否有必要?

shanghainese

引用:

下面引用由fangdang在 2004/03/10 09:45am 发表的内容：
其实我几乎没做过同时多步修复的.是否会增加背景,或者说是否有必要?

完全赞同。
要是抗体不对路，怎么修复都不行。先微波煮再胰酶消化，片子不掉吗？细胞不化吗？
还不如换一抗，找个好的抗体。

fangdang

问楼主你的一抗是什么?哪个公司的.我帮你查查修复条件.

raccoon

[这个贴子最后由raccoon在 2004/03/12 09:17pm 编辑]

一抗是博士德的IV型胶原，修复条件是消化，但据说裸鼠种植瘤非常难做，我试用胰酶修复，没出来，单用微波，也没出来，

Dingwei

[这个贴子最后由Dingwei在 2004/03/12 11:05am 编辑]

IV型胶原修复条件是必须用酶消化，博士德的IV型胶原我们也有，效果很好，但用在裸鼠种植瘤上就难说了，我在裸鼠种植瘤上做过CD34，8因子，CD31，都不着色。请做过的高手说一说有什么好办法。

冰雪

同意丁老师的建议，本人曾做过I、II、III、IV胶原免役组化染色都采用酶消化的方法，当然不是博士德公司。
还有就是在裸鼠种植瘤上做CD34、CD31、染色效果不理想（博士德公司）。血管有着色、间质也有一些，（坏死部位排除），后与公司联系他们把做好的阳性对照片寄过来，且不说染色（背景一片黄色，与血管标记难以区分），切片质量更是难以接受。
不过庆幸的是VEGF染色效果不错。

raccoon

[这个贴子最后由raccoon在 2004/03/12 09:20pm 编辑]

我们实验室老师说，裸鼠的IV型胶原很难做出来的，这是他的看家本领，不肯教我，我考虑了很长时间，估计是抗原修复这一步的问题，所以用不修复、微波、酶消化都试过，都没做出来

dingwei

酶消化,一抗室温过夜，或室温24小时看一下有没反应。

yjd

我认为先找到好抗体，对于IV型胶原类抗体只有用胰酶修复，其他方法都不符合这类抗体的特性和要求。