gaoqin740

实验不顺，再次请教各位老师几个问题：
1  是否石蜡切片能做出来的，冰冻切片一定能做出来？
2  冰冻切片是否绝对不需要修复，高温，高压，也不要用修复液？
3  冰冻切片抗体的表达与固定方法关系大不大？我做的是一种大鼠心肌的蛋白多肽，用过丙酮固定，多聚甲醛蔗糖溶液固定，都没做出来。片子是一片黄。有人建议再换固定方法，但书上固定方法有30多种，不会要逐个摸索吧？同时用丙酮固定的切片，别的指标做得还可以，能否说明我的固定没问题。还是不同指标不同固定方法。那麽大鼠心肌的蛋白多肽（表达在胞浆）最好用什么方法？
             多谢！！！！！

dingwei

1  石蜡切片能做出来的，冰冻切片一般都能做出来。
2  冰冻切片绝对不需要修复，高温，高压，也不要用修复液。
3  可能是一抗不过关或表达不好。一般用多聚甲醛固定就可以了。

gaoqin740

谢谢丁老师，我还是把重点放在冰冻切片上多试几次

王挺

冰冻切片抗体的表达与固定方法有一定的关系。这于什么组织有一定的关系。
可能是不好或有是抗原稀释不佳有关啊。

hjchjc

你的片子一片黄，可能是固定不及时，固定不足，导致抗原弥散。我想，是否可以采用活体灌流的方式进行固定，固定液可用95％酒精，中性甲醛，冷丙酮等都是可行的。

yjd

对于冰冻切片做免疫组化时，首先要控制好非特异性着色，从楼主提供的现象看，我认为1、动物组织本身内源酶就非常高，所以要解决内源酶的问题，可以用卵蛋白类物质加以控制即可，如蛋清；2、在选用放大系统的试剂盒时最好不要选用含有生物素标记的试剂盒，可以选用两步法的试剂盒（如迈新的KIT-9901/2/3就既敏感高又特异性好）；3、还可以选用直接针对动物组织的放大系统的试剂盒。只要做到有效控制非特异性着色冰冻切片做免疫组化同样得到很好的结果，因为现在的免疫组化特异性抗体比以前的要稳定得多（除非个别抗体的克隆号或基因不稳定，易造成特异性抗体质量不好外）。