xiawei

我在免疫组化的过程中碰到一个问题一直无法解决：我做的是冰冻切片，FITC二抗，一抗封闭用的是5％奶粉，二抗封闭10％正常羊血清；发现对照即使是在未加任何抗体的情况下也会有自发荧光的现象，而且用紫外等其他几种波长也可以激发出荧光。这样我觉得我的真实信号可能会被掩饰了，怎样能去除这些自发荧光呢？这里先谢了！

shanghainese

试试去掉奶粉和正常羊血清，仅用PBS来稀释。

xiawei

谢了先！
不好意思，我没说清楚，其他组织（自发荧光的是石斑鱼雄性性腺）按此方法都无此现象，可能不会是牛奶或正常羊血清的问题。

shanghainese

还可把二抗换成Biotin或HRP标记的，用DAB显色。对自发荧光很强的组织，不要做荧光免疫组化。许多海洋生物都能产生自发荧光。

xiawei

多谢 shanghainese！Biotin或HRP标记，用DAB显色的我也试过，阴阳性差别也不明显（是否我用的试剂盒不太好，你们常用的是那些公司的?).另外Biotin或HRP标记的方法我用的是试剂盒上提供的方法，是否有那些很重要的东西我没注意到，还请指正，多谢！

shanghainese

用Vector公司的ABC试剂盒。