lumangmang

免疫组化过程中，具体的时间各个人看法都不同，我想请问这里的高手们，你们用多长时间。
我用的时间是：双氧水封闭：  1小时
               抗原修复      10分钟
               血清封闭      37度一小时
               一抗          过夜一般14－16小时
               二抗          37度   1小时
   各位认为时间有问题吗，请指点小弟一下。
   还有脱蜡完了，你们一般用什么洗，多长时间，最好能把各位的免疫组化步骤贴出来，大家讨论一下。

好好

我觉得你的双氧水、血清封闭时间太长了，一般30分钟就行了。至于一抗、二抗的时间要看不同的抗体，需要自己摸索的。

黄河

我用的时间是：双氧水封闭：  半小时
              抗原修复      高温法:修复液预热20分钟,修复15分钟
              血清封闭      室温40分钟(其实跟15分钟效果差不多)
              一抗          4度过夜一般18小时(3PM到8AM)
              二抗            室温   半小时
              三抗          室温   半小时
              苏木素        1.5分钟
              盐酸分化液    1到两秒
比较以下,除了抗原修复,楼主的时间好象都比我做的时间长.

frankbj

             双氧水封闭：  15分钟
             抗原修复      高温法:修复液预热20分钟,修复15分钟
             血清封闭      室温15分钟/37度
             一抗     二抗    三抗   （不同公司提供试剂盒都有说明的，可以稍长些）                    
             苏木素        1.5分钟
             盐酸分化液    1到两秒

lumangmang

多谢各位指教，各位结果理想吗

黄河

有理想的
有不理想的
不理想的主要是试剂的问题
跟我的实验步骤好象关系不大
因为反复调整时间
没有多大区别

fangdang

我用的时间是：脱蜡完了，可用梯度酒精水化后用自来水冲洗即可
              3-10%双氧水封闭：10分钟
              抗原修复      按各抗体不同要求决定
              血清封闭      10分钟
              一抗          4.c 冰箱过夜.或室温下一小时.
              二抗          37度  10分钟
  
              对比染色后可以用PBS返蓝可节省很多时间.

chunyan111

请问各位：3%的H2O2是直接滴加到玻片还是用甲醇稀释后浸泡？

好好

甲醇稀释后浸泡！

fangdang

我的用法:3%的H2O2是用甲醇稀释后浸泡