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HE染色褪色怎么办?

HE染色褪色怎么办?

各位老师:我科室最近一年的HE染色褪色现象非常严重!我的染色步骤:100度温度烤片15分钟—》环保透明剂透明I、II两步各3分钟—》梯度酒精—》苏木素(自配)10分钟—》水洗—》分化10秒—》水洗—》返蓝(碳酸锂)—》水洗—》75%酒精5秒—》伊红(醇溶)—》75%酒精10秒—》85%酒精10秒—》95%酒精3分钟—》100%酒精I、II各3分钟—》吹风机吹干—》环保透明剂I、II、III各3分钟—》环保胶封片!不知道哪个步骤出问题了!向老师们求教!
最近还出现一个问题:片子不干净,镜下细胞有皴的现象!

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褪色是个比较复杂的问题,跟很多都有关的,我觉得有以下原因,有可能不全面:

组织处理没处理好,就是组织固定,脱水没弄好
染色液的酸碱度不合适
染色后脱水透明不当
封片胶的酸碱度不合适
封片时没封好(进入水分,气泡,或者胶少没封全),或者封片胶挥发(我们就遇到过,用的环保胶水,片子放几个月里面全是空洞,里面环保封片胶没了)
切片保存不当等


具体只能你自己去根据你们的情况分析解决了



只能从你给的信息给一点意见,仅供参考
1、拷片温度过高65℃左右   拷片半个小时到一个小时。
2、切片脱蜡两缸各3分钟 时间太短,建议每缸调到5-10分钟
3、梯度酒精后水洗1分钟后再染苏木素
4、反蓝后水洗时间5-10分钟
5、伊红前一步不用过酒精
6、后面透明前不要吹干片子,去掉吹干那一步
7、湿封片

组织一定要处理好,反蓝后水洗时间要长一点,或者不用反蓝液直接自来水水洗反蓝。透明最好用二甲苯透明,封片最好用中性树胶湿封,
因为那些环保封片胶超贵不说,关键是不知道里面是什么成分,我们之前就是用了这东西,片子放段时间后里面全是空洞

如果你们是很短时间就褪色特别严重,估计是反蓝后水洗不够,封片问题(吹干后透明封片)或者是封片胶的问题(环保透明剂和环保封片胶)的可能性大。

本人对这方面问题认识有限,只能给你部分提示,不代表我的意见就是对的,如果有不对的地方,还请多多包涵。

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谢谢老师!酸碱度我们从来没测过!我再按你说的步骤试一下!谢谢

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苏木素之前有水洗,忘记写了,脱水之后如果不吹进透明之后片子上面都是水珠!

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回复 4# 的帖子

如果天气潮湿,会出现你说的那样,可以加一缸无水乙醇,无水乙醇要勤换,如果还是不行,可以加一缸石炭酸二甲苯(1:3)3-5min,不过后面二甲苯不干净,石炭酸没洗脱干净有残留的话,切片也容易褪色。
菜鸟一个

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谢谢老师!

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楼上老师说的很对,补充几点我们的方法,用自来水反蓝吧,15分钟左右,流水。在烤片机烤片15分钟后,可以用65度左右烤箱烤片,把片子放到染色筐内再放入烤箱烤15分钟左右。不知道楼主是在南方还是北方,要是在北方要注意染片室室内温度,这个也很重要

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温度是不是有点高啊
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温度跟染色有关吗

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反蓝可以温水吧

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