好好

我是新手，诚心请教各位前辈！
我在做小鼠脑片的免疫组化。是冰冻切片。脑子是否应用4%多聚甲醛固定后，再用30%蔗糖磷酸液浸泡过夜后切片？还是可以直接切片后，用冷丙酮后固定？
我以前是直接切片，-20度冰箱保存，做之前先用冷丙酮固定，这样可以？

dingwei

可以

好好

谢谢丁老师！
可是有些人说必须用多聚甲醛前固定，冲去血块以减少背景色。是这样吗？

shanghainese

I did a lot neural immunohistochemical work.
Most neuropathologists still use floating frozen section for neural staining.  But you can use routine frozen or paraffin section method.

好好

shanghainese 好
我也看到过一些研究者做漂片，可受实验室限制，一直采用冰冻切片，而且居我所知，漂片的切片比较厚，8微米的可能不能做吧？我是新手，以后还要向你请教一些脑片方面的问题。

shanghainese

好好:
小鼠脑片的免疫组化冰冻切片是可以直接切片后，用冷丙酮后固定。
Floating frozen section normally cut 30 to 40m, because neuron is much big then other cell.

好好

shanghainese 大师好：
谢谢你的指点。我想问清楚些，切片切好后，马上用冷丙酮固定，然后放入-20度冰箱保存呢？还是吹干后，放入4度冰箱保存，做之前用冷丙酮固定？
这里还有个问题，我一直弄不懂，切片切好后，应放在-20度还是4度保存，能保存多久？？望答复。

dingwei

一般的文献都说：切片切好后，吹干后，放入4度冰箱保存，不容易掉片，缺点是细胞结构不清，免疫组化结果定位不是很好。马上用冷丙酮固定，然后放入4度冰箱保存，免疫组化结果定位好，胞结构清，缺点是有的地方会浮起来。至于能保存多久没试过，一般来说一个星期应该可以。

shanghainese

好好:

我是冰冻切片,吹干,丙酮固定,吹干,然后放入-80度冰箱保存。

好好

衷心感谢老师们对我的指点！
我决定综合采用你们的方法。谢谢！