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为什么CD133细胞核阳性

为什么CD133细胞核阳性



1、标本是乳腺癌组织白片

2602小时。
3、二甲苯三缸Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、脱蜡,各10分钟。
4、无水乙醇两缸,各 2分钟;
595%酒精二缸,各 2分钟;
6、自来水流水冲洗2分钟;
7PBS冲洗2分钟;
8、将已冲洗干净组织放入高压锅内,加入约2000ml左右柠檬酸盐的抗原修复液(pH6.0)盖好高压盖检查安全筏,沸腾喷气1.5分钟。
9、自然冷却移至蒸馏水中浸泡2分钟。
103%H2O2中浸泡10分钟,蒸馏水冲洗3min×3次。
11、取出切片,擦干组织周围的水,用免疫组化油笔画圈笔在组织块周围画一圆圈,
12PBS缓冲液冲洗。
13、加一抗(CD133)孵育(PBS配制,1100,将切片放入孵育湿盒中,4的恒冰箱中过夜。
14、用PBS3次,每次3分钟。
15、加二抗在组织上、放入37恒温箱中孵育30分钟。(兔/鼠通用二抗)
16、用PBS3次,每次3分钟。
17DAB显色。
18、苏木素染液复染10分钟,
191%盐酸酒精分化3秒钟。
20、流水冲洗5-10分钟。
2195%酒精二缸,各 2分钟   无水乙醇两缸,各 2分钟;
22、二甲苯III、Ⅲ,各2分钟23、中性树胶封片
结果:我自己觉得CD133是细胞核阳性。不知道是什么原因,帮我在分析一下
这是厂家第二次给我的抗体,第一是细胞核我以为是抗体原因。
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哪家公司的产品?
什么克隆?

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阳性对照做了吗?也是这样?

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博士得公司   兔的多克隆    就是想做阳性对照可是  做出细胞核阳性了

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博士得   检查过说没有问题    是重新发给我的抗体   新抗体还是这样    想问原因

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引用:
原帖由 2836yzzy 于 2012-9-3 11:13 发表
博士得   检查过说没有问题    是重新发给我的抗体   新抗体还是这样    想问原因
你把一抗多稀释几个浓度,比如1:100,1:500,1:1000和1:2000,再试一次。
如果还是有问题,建议你退货。

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另外,查看一下说明书是如何建议作抗原修复的。

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说明书上没有说是什么修复,我只稀释到1:200过   都一样

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引用:
原帖由 2836yzzy 于 2012-9-3 12:32 发表
说明书上没有说是什么修复,我只稀释到1:200过   都一样
那就省略修复这一步骤。

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你说不用修复  我去做一下  看看结果怎样   谢谢

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