娟子

请教各位高手：
    我采取大鼠肝脏组织，处理步骤如下：处死后立即取肝组织（厚度不超过0.5厘米）于10％中性福尔马林中固定，（固定液量足够，时间超过24小时）；75％酒精过夜、85%/酒精1小时、95％酒精2小时、两道100％酒精时间1.5小时，透明45分钟－1小时。浸蜡两小时，温度约58度。5微米切片，切片时感觉组织很硬，展片时蜡可以展平，但是组织柔软，不能展平且与蜡分离。请问是哪一步出现了问题？
    PS.部分肝组织固定后呈粉红色，会不会是组织固定不好？如果是固定的问题，请问在固定时要特别注意什么问题？  :em14:

wuyingjie

透明过长30分钟应该够了，过长组织会发硬切片易碎，蜡块温度不能太低，太低了易碎，也不展会卷。

fw1418

先从组织说起,是否出血过多?动物模型是什么?是肝损伤?还是损伤再修复?固定时间应该够了,动物组织较娇嫩,脱水时可以考虑从50%酒精开始,两道100%时间不要超过40分钟,浸蜡不要超过1.5小时.出血过多时试试热敷.试试看效果如何?

娟子

感谢各位不吝赐教。我会试试看的。我的动物模型是化学药物诱发肝癌，但是正常对照组也出现了同样的问题。至于透蜡的温度，因为我还要做免疫组化，所以不知道能不能超过60度。现在我已经更换了两次福尔马林，但是组织还是呈粉红色，不知是不是固定不好所致？还有就是透明时间根据什么来判断？

法医

奇怪，我做人的肝脏切片，固定不充分就是呈现粉红色。是不是你的甲醛有问题？试剂瓶底下是否有很多沉淀？是否将甲醛液的浓度升高一些？我一般都用15—20%。动物组织比较娇嫩，透明可以用氯仿，优点是组织处理时间长一些也不会透明过度。我在学校时老师就是用氯仿处理鼠的组织，效果很好。对于肝脏，我的感觉是透明的终点不好判断（人的，鼠的没有见过，不好瞎说），一般是凭经验。氯仿更换2次，每次2-3小时是足够的。即使过夜也可以。就是石蜡要多更换一次，共需要3次，约60度，每次1小时。

娟子

[这个贴子最后由娟子在 2004/05/22 10:21am 编辑]

我已经更换了甲醛，但是还是有粉红的现象。试剂瓶底下是有很多沉淀。我这次试用15％的。感谢法医的指教。但是不知道15％的福尔马林会不会浓度太高？

法医

试剂瓶底下有沉淀说明试剂已经变质，甲醛浓度不够标称浓度。我就吃过亏。这种情况的出现一般是甲醛保存不当，被冰冻所致。这时试剂已经报废，无法补救。反正甲醛也不贵，重新买新的好了。
我没有搞过免疫组化，这些是我搞HE的经验。但是我想市售的甲醛溶液浓度本身就不稳定，为37-40%，配制的试剂浓度只要不是太高应该没有什么影响。而且对于脑组织，很多资料都介绍10%的浓度是肯定不够的，应该是20%。而且你固定的时间比较短，切片又要进行抗原修复，不应该有什么影响。

王挺

我收益非浅啊！