zhangyanxin335

我要做免疫组化，可是采完组织后没有及时固定，直接放-80了，我想问一下，这样还能做免疫组化吗，我看有资料说会导致抗原弥散，是这样的吗？如果是有什么办法弥补吗，因为已经这样了，再采新鲜的组织也不容易，各位大虾，给解答一下吧，急急急！

LF100191

可以做免疫组化，但需要查阅相应抗原是否可以使用冰冻切片或冰冻切片之后的后固定；若还要使用石蜡切片也可以固定；所谓的抗原弥散可能不一定完全避免了，但光镜水平未必能看出来弥散，要看阳性反应位置。供参考。

shanghainese

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原帖由 zhangyanxin335 于 2012-9-18 20:16 发表
我要做免疫组化，可是采完组织后没有及时固定，直接放-80了，我想问一下，这样还能做免疫组化吗，我看有资料说会导致抗原弥散，是这样的吗？如果是有什么办法弥补吗，因为已经这样了，再采新鲜的组织也不容易，各位大 ...

采完组织后没有及时固定，直接放-80了，这样还能做免疫组化。
导致抗原弥散的原因，组织自溶了，或者冰结晶。
如果一抗的特异性不好，那是另一回事。

zhangyanxin335

好的，那谢谢你了，我还想问一下，我做完之后的背景色太严重，怎么消除呢？

shanghainese

引用:

原帖由 zhangyanxin335 于 2012-9-24 13:40 发表
好的，那谢谢你了，我还想问一下，我做完之后的背景色太严重，怎么消除呢？

您是做了石蜡切片还是冰冻切片?
您能否说说您所用的一抗的具体情况?

zhangyanxin335

您好，我做的是石蜡切片，一抗是自己制备的多克隆抗体，每次都是做梯度稀释，但是总感觉都是背景色，看不到阳性信号！

shanghainese

如果是自制的多抗,你用的是血清,还是purified antibody?
在多抗制作过程中,都要测抗体的滴度。不知你的多抗滴度试验结果好吗？
看看ELISA, Western Blot 怎样。

shanghainese

再有，如果是用protein G purified出来的多抗，有效抗体可能比较少。

zhangyanxin335

我是提纯后的多抗，如果有效抗体少的话，就不会出结果吗，还是阳性信号较弱？

shanghainese

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原帖由 zhangyanxin335 于 2012-10-5 11:01 发表
我是提纯后的多抗，如果有效抗体少的话，就不会出结果吗，还是阳性信号较弱？

抗体是不是没有纯化好? 以至抗体的特异性差了。或者一抗有aggregation。
总之一抗很可能有问题。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-10-11 22:30 编辑 ]