小谭

最近在做免疫组化，片子除了掉片不说，用了黏附玻片是终于不掉片了，但是结果出不来，是阴性的。前晚切片烤片65℃一小时，
今早脱蜡 两缸每缸7分钟，然后梯度酒精复水，水洗2分钟，PBS 3X3'，水洗一分钟，H2O2灭活20分钟，水洗一分钟，PBS3X3'，柠檬酸微波炉修复 高火4分钟中高火6分0钟/EDTA水煮20分钟，室温静置20分钟，PBS

3X3'，加一抗 室温60分钟，PBS

3X3'，加二抗室温25分钟，PBS

3X3'，DAB显色，复染。请教各位我所说的以上步骤有什么错误吗？

jensen0901

几个问题，个人建议：1，前天切的片子，今天做组化，片子是怎么保存的？
2，切片脱蜡到水后，PBS洗后，又冲水，那为什么要PBS洗？
3，双氧水浓度是多少？3% 10分钟就可以了，不需要20分钟。
4，修复，微波修复高火4min ，中高火建议15-20min，一般600ml修复液，组织是不会干涸的，水浴EDTA，温度是多少，如果95℃，建议大道95℃后20分钟。
5，一抗，虽然现在很多厂家抗体孵育是室温30min-1h，但个人建议室温1.5h。
6，二抗，用的哪家公司的，建议15min-20min。
以上都是个人建议，欢迎交流

donyln

建议直接改用高压修复。省时，高效，也是免疫组化修复的常用方法啊！