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『 免疫组化』
» 困惑了好久的问题
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困惑了好久的问题
小谭
小谭
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发表于 2015-7-16 22:28
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困惑了好久的问题
最近在做免疫组化,片子除了掉片不说,用了黏附玻片是终于不掉片了,但是结果出不来,是阴性的。前晚切片烤片65℃一小时,
今早脱蜡 两缸每缸7分钟,然后梯度酒精复水,水洗2分钟,PBS 3X3',水洗一分钟,H2O2灭活20分钟,水洗一分钟,PBS3X3',柠檬酸微波炉修复 高火4分钟中高火6分0钟/EDTA水煮20分钟,室温静置20分钟,PBS
3X3',加一抗 室温60分钟,PBS
3X3',加二抗室温25分钟,PBS
3X3',DAB显色,复染。请教各位我所说的以上步骤有什么错误吗?
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jensen0901
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发表于 2015-7-17 16:41
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几个问题,个人建议:1,前天切的片子,今天做组化,片子是怎么保存的?
2,切片脱蜡到水后,PBS洗后,又冲水,那为什么要PBS洗?
3,双氧水浓度是多少?3% 10分钟就可以了,不需要20分钟。
4,修复,微波修复高火4min ,中高火建议15-20min,一般600ml修复液,组织是不会干涸的,水浴EDTA,温度是多少,如果95℃,建议大道95℃后20分钟。
5,一抗,虽然现在很多厂家抗体孵育是室温30min-1h,但个人建议室温1.5h。
6,二抗,用的哪家公司的,建议15min-20min。
以上都是个人建议,欢迎交流
安守本分,沉默是金!!!
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donyln
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发表于 2015-9-3 16:39
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回复 1# 的帖子
建议直接改用高压修复。省时,高效,也是免疫组化修复的常用方法啊!
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