annelee

:em15: 我做肿瘤坏死因子在肾脏中的表达，还有黏附分子。非特异性背景很高，怎么解决？？那一步出了问题啊？和造模有关系吗？请各位老师给与指教！！谢谢！

shanghainese

由于肾脏里有大量的内源性生物素，所以背景很高。解决办法是用生物素阻断试剂盒，如vector 公司等等。也有人用鸡蛋清。

liuhuaqin

也可用EnVision二步法，避开肾脏里的内源性生物素，降低背景染色。

annelee

谢谢各位老师可以把具体操作步骤告诉我吗？？谢谢！！

shanghainese

引用:

下面引用由annelee在 2005/01/12 10:14pm 发表的内容：
谢谢各位老师可以把具体操作步骤告诉我吗？？谢谢！！

Avidin/Biotin Blocking Kit, Vector 公司下面的网页里有，您可去看看。
http://www.vectorlabs.com/products.details.asp?prodID=21&locID=143

annelee

老师，有中文的资料吗？？

shanghainese

晶美有售Vector 公司的亲和素/链亲和素－生物素封闭试剂盒 (Avidin/Biotin Blocking Kit)  货号   SP－2001，  800元/盒。
“用于VECTASTAIN ABC 试剂盒或其它亲和素/链亲和素－生物素放大系统的免疫组化检测时阻断亲和素或生物素化产品与内源性生物素或亲和素的非特异性结合。试剂盒组分：18ml 亲和素/链亲和素，18ml生物素。”
具体方法是在ABC法或SP法染色前，将亲和素(Avidin)溶液滴加在切片上，室温中孵育15分钟，PBS洗3次(5分钟) 。再加Biotin，同样室温中孵育15分钟，PBS洗3次(5分钟) ，后即可染色。
转摘晶美资料：
饱和处理内源性生物素：消除内源性生物素的方法是事先滴加亲和素，以饱和内源性生物素，使之不再有剩余的结合位点。具体方法是在ABC法或SP法染色前将切片浸于25ug/ml亲和素溶液中处理15分钟，PBS清洗15分钟后即可染色。

annelee

shanghainese老师，我做预实，不知是否非特异性染色，请你帮忙看看。谢谢！肿瘤坏死因子——肾脏。
怎么图片发不出去阿！！

annelee

shanghainese老师，图片太大。发不过去。我可以给你发在你的邮箱里吗。可以告诉我地址吗。我需要你的帮助。

shanghainese

我的邮箱里: sandiegold@yahoo.com.cn