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冰冻切片冰晶如何消除？ :em06:

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组织冻结过程中，细胞内、外的水分会形成冰晶，冻结的速度愈慢，冰晶颗粒愈大，可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。
1、冰冻组织块的常用方法
•  液氮中冰冻：组织投入液氮中 (一196C)中10～20sec；
•  干冰中加入丙酮(或异戊烷)，液体立即气化起泡，温度降至一70C ，将组织投入，若在干冰丙酮中置一盛有异戊烷的容器，组织投入该容器内结冻则更好；
–  上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内，以保护组织。
–  制成冻块后若需保存，应以铝箔或塑料薄膜封包，贮存于-70 C冰箱。
2、切片
•  供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整，并有连续性。
•  载玻片也应清洁无油污，但一般无需涂抹粘附剂；
•  切片时，使用恒温冷冻切片机，在箱内温度-25 C 。切片厚度一般为4～8m。
3、切片后处理
•  切好的冰冻切片，室温下自然晾干1～2h后，入4C丙酮固定10min，待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。
•  冰冻切片由于切片技术要求较高，不易得到连续性很好的切片，其形态结构亦不如石蜡片，且冻块和切片不便于长期贮存，因此冰冻切片的应用受限。