teargone

我将细胞放在96孔板上培养，想直接在孔中利用免疫组织化学的方法检测细胞中的病毒，如何操作？急！

shanghainese

为何不用cultureslide?

teargone

因为我培养的量特别少，使用的国外血清特贵，况且我们实验室的只有倒置的显微成像系统，玻片无法看

shanghainese

在cultureslide和96孔板上一样培养细胞，一样可以用倒置的显微镜观察和拍照等等。

teargone

今天我在96孔板上用丙酮固定，结果板全被溶解花了！可能是丙酮能与板发生反应！我的步骤是：1.将细胞培养液倒掉，pbs冲洗三遍  2.丙酮固定，4度，30分钟（现在想换固定液) 3.pbs洗三遍  4.37度烘干 5.用0.3%的tritonX-100消化10分钟，pbs洗三遍 6.3%的H2O2处理15分钟，蒸馏水洗三遍 7.正常山羊血清封闭20分钟 8.加一抗4度过夜，pbs洗三遍 9.过氧化物酶标记的二抗，37度1小时pbs洗三遍 10.DAB显色，复染。请问，我可以用什么固定液取代丙酮？复染后我还需要脱水透明马？步骤有没有问题？谢谢版主了！

shanghainese

叫你做cultureslide你不听，你以为丁香园的哪位朋友给你的方法能用？
96孔板是塑料做的，而cultureslide的基质是玻璃的。塑料遇上有机溶剂就会溶解。
还是劝你放弃96孔板，另想别的办法。

liuhuaqin

用爬片可解决，注意玻片的正反面。