恒恒

各位学长：
    刚刚开始做免疫，遇到了不少困难，有个问题一直都没能解决，恳求各位学长不吝赐教：
   一抗浓度的问题：1.说明书没有提供稀释浓度，2.开始从1：50--1：200，所有的片子全是阳性，3.很多文章做的相关浓度不一样，比如有1：1000，1：5000，还有1：300看得现
在心底没底了，
各位学长，我应该怎么样去配置这个浓度呢，难道真的只能从开1：50开始稀释直到出现阴性结果为止？

shanghainese

一般说明书上抗体都有“建议”使用浓度或稀释度。但是有些公司的这个“建议”使用浓度或稀释度不准确。我的意见是您可以在“建议”使用浓度或稀释度的上下选几个不同的浓度或稀释度来测试。比如“建议”用1：100， 您可以选1：25， 1：50， 1：100， 1：200和1：400等几个稀释度来测试。
有的公司的产品要1：50稀释，有的要1：1，000稀释，这是很常见的事。要根据他们的要求来做。如果说明书没有提供稀释浓度，你可以直接与他们的技术服务部联系。如果中国代理商没有信息，您可以直接与外国公司联系。在说明书上都有他们的联系地址。

恒恒

谢谢，昨天用1：5000做的，非特异性染色少了很多，但是出现一个奇怪的现象：组织周边都染色很深，呈强阳性，在没有任何组织的区域也有不少染色，这跟冲洗有关么？？？

shanghainese

这可能是边缘效应。注意一下，每次加的抗体量最好不要少于100微升并要覆盖过整个切片。