bagelo

PAS染色不上色是什么原因呢？试剂是从公司买的，以前用还很好用，最近几次染色颜色都很浅或者几乎没颜色，是不是温度的问题，以前我在室温染半小时，颜色很好。雪夫试剂是应该放在4℃保存吗？用之前恢复到室温。还和什么因素有关呢？请大家帮我分析一下吧，谢谢了

ylzhao

PAS染色不上色多半是雪夫氏试剂失效,雪夫氏试剂有失效期,雪夫氏试剂质量好可贮存1年,质量不好的3个月甚至更少.无论公司购买还是自己配制随着时间推移都会失效.冷冻保存可以延长雪夫氏试剂的有效期.

[ 本帖最后由 ylzhao 于 2007-1-25 12:52 编辑 ]

bagelo

哦，是这样啊，谢谢了，请问有雪夫氏试剂的配方吗？我想自己配着试试看

ylzhao

试剂配制：
（1）0.5%过碘酸（HIO4）水溶液或70%酒精溶液。
（2）Schiff氏试剂。
碱性品红                                          1g
蒸馏水                                             200ml
1N盐酸（98.3ml比重1.16盐酸，加入蒸馏水成1000ml） 20ml
偏重亚硫酸钠                                  1g
碱性品红1g加入200ml蒸馏水，搅拌加热沸腾，待冷却至50℃过滤，加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处，两天后溶液变桔黄色或草黄色，然后加入少量活性碳并震荡、过滤，此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色，染色效果较差。

bagelo

谢谢了，我要自己配置=）

bagelo

版主,我按照你的方法配制了PAS,但是失败了,配完后避光放置了两天溶液是深棕色,加了活性碳也没什么变化,过滤之后还是深棕色,是什么原因呢,请教一下.谢谢了

ylzhao

配制方法不会有问题,配制时选用纯度高的试剂.

bagelo

我看了试剂包装，都是分析纯的,用超纯水配的

wsqin326

可以参考杜卓民主编的<最新实用组织学技术>中关于糖原染色的方法,里面有详细的介绍关于Schiff试剂的配制方法.个人认为配好后冷却至室温,加入活性炭后就可以马上过滤了,不用避光2天后再过滤.具体请参考杜卓民老师书中的方法,我按书中的方法配出的试剂相当好用,而且在4度可以保存3个月以上.

aksshujie

用冷配法比较好。所用东西都一样，不过我们使用蒸馏水的量是174毫升，亚硫酸氢钠是3.8克。当量盐酸是1毫升盐酸加蒸馏水到12毫升。按前面那个配方依次加入容器。最好是棕色瓶，实在没有，可以用纸包起来。剧烈震摇2小时，加活性炭1克，震摇十分钟到半小时，过滤便可使用。活性炭不可加过多，亚硫酸氢钠不能少加。滤出颜色如为淡黄色，是活性炭吸附时间太短。最重要的是所有器具必须用蒸馏水冲洗干净。试剂之所以会失效，主要是因为亚硫酸氢钠的那种略刺鼻气味的消失或减弱。如果有兴趣，就试试看吧。