zhba0918

各位老师:
       我在做组化,用H2O2处理切片时为什么有的切片为什么会出现气泡,有的则没有?
对免疫组化有什么影响?


               期待回复!谢谢!

fangdang

起泡通常是切片中红细胞过多。如果用甲醇作为溶剂可以解决气泡问题。

蓝斑

我做组化的时候也出现过这种现象，看到版主的回复才明白咋回事啊，呵呵。谢谢！
不过我也用过甲醇配过氧化氢，但是切片（大鼠脑片，20 um漂片）会皱缩到一起！另外，就算使用蒸馏水做溶剂，仍然会出现皱缩现象，现在我只好用PBS做溶剂。
请问版主为什么会出现我遇到的皱缩现象呢？用PBS做溶剂应该没有什么影响吧？

P.S. 终止DAB染色反应的时候如果用蒸馏水，脑片也会皱。这时再将脑片丢进PBS中，会恢复平整。

谢谢！

fangdang

用蒸馏水、PBS、甲醛来配置过氧化氢都可以，只要能把组织中的内源性过氧化物酶完全灭活即可－－－组织片加了过氧化氢后再加DAB不显色。

meizhou

引用:

原帖由 蓝斑 于 2007-6-4 15:16 发表
我做组化的时候也出现过这种现象，看到版主的回复才明白咋回事啊，呵呵。谢谢！
不过我也用过甲醇配过氧化氢，但是切片（大鼠脑片，20 um漂片）会皱缩到一起！另外，就算使用蒸馏水做溶剂，仍然会出现皱缩现象， ...

皱缩是不是因为前面没有固定好啊？

蓝斑

我也考虑过是否是固定的原因。但是皱了的片子放回PBS中还能平整回来，这看起来是个跟渗透压相关的现象。是吗？
谢谢meizhou的意见。

meizhou

我的QQ号码是55323032，欢迎大家和我讨论细胞凋亡检测方法的实验经验和心得，欢迎赐教。身份验证请注明细胞凋亡。

shanghainese

引用:

原帖由 蓝斑 于 2007-6-6 13:05 发表
我也考虑过是否是固定的原因。但是皱了的片子放回PBS中还能平整回来，这看起来是个跟渗透压相关的现象。是吗？
谢谢meizhou的意见。

是不是前面没有固定？

蓝斑

我是用多聚甲醛灌流固定过的，难道是我没固定好？请问shanghainese老师：固定不好是如何引起皱片的呢？

是不是前面没有固定？ [/quote]

shanghainese

引用:

原帖由 蓝斑 于 2007-6-11 09:47 发表
我是用多聚甲醛灌流固定过的，难道是我没固定好？请问shanghainese老师：固定不好是如何引起皱片的呢？

是不是前面没有固定？  

甲醛灌注固定技术性比较高，灌注固定不好的事时有发生。
没有看过您操作，不傲下结论。只是怀疑而已。