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求助:一抗为IgM,整张片子弥漫很强的背景着色!怎样解决?急!!!

求助:一抗为IgM,整张片子弥漫很强的背景着色!怎样解决?急!!!

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做免疫组化过程中遇到了难题,尝试了许多方法都无法解决,恳请大家的帮助。
    我要检测的抗原是OA软骨中的X型胶原,一抗是abcam公司的产品,货号:ab49945,小鼠抗人单克隆抗体,类型为IgM,二抗购自JacksonImmunoResearch公司,兔抗鼠IgM(Peroxidase-conjugated Affinipure Rabbit Anti-Mouse IgM,μChain Specific (mimimal cross-reaction to Human Serum Proteins))。步骤:免疫组化常规烤片,脱蜡,入水后,3%的过氧化氢室温阻断10min,胃蛋白酶37℃消化半个小时,然后用兔血清封闭30min,倾去血清后,加一抗,4℃过夜;加二抗,室温孵育一个小时,最后DAB显色,结果整张切片都是很深的背景着色,将一抗稀释到1:2000,二抗稀释到1:400,仍然是整张切片都是较深的背景着色。    一起做的还有II型胶原,一抗的类型是IgG,也是购自abcam公司,二抗也是Jackson公司的,步骤也相同,就染的很好,没有出现上面的问题。
    请问,是不是因为一抗是IgM的原因,所以出现这么强的背景着色,那么有没有什么解决方法呢?跪求各位高手指点!

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