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特殊染色

特殊染色

求助:最近做幽门螺杆菌的银染,染出来的组织总是绿色的,方法是按照传统的w-s银染方法做的。实在是不知道问题出在哪了。请帮忙指教一下!

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你用的染料不对吧,或者配制的PH值有没有问题啊?

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我用的是进口的硝酸银,对苯二酚是北京北郊化工厂的,明胶是上海明胶厂的,PH值书上说是要求3.6-3.8,我测了一下我配的缓冲液PH是3.84。显影剂是明胶15ml、对苯二酚1ml、硝酸银2ml。再请教下,难道是我用的硝酸银有问题吗?

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我们一直都是用的亚甲蓝在染幽门螺杆菌的,其实效果不错,何必要用六胺银呢?
Just turst youself!

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直接用HE看幽门螺杆菌,效果也不错
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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幽门银染试剂

您好,我是北京世济合力公司小刘,我们有做银染的试剂效果相当好,有什么需要请电话联系13522920477

【产品名称】通用名称:银染试剂盒(改良银染法)
           商品名称:幽必现
           英文名称:Heli Emerging
【包装规格】5片装/盒
【预期用途】:染色人和动物体内幽门螺杆菌、海尔曼杆菌、螺旋体、侵袭性真菌、巴尔通杆菌、鼻硬结杆菌、双球菌、Rochalimace属杆菌、炎性渗出物、尘埃颗粒、黑色素颗粒等及机体内各种组织结构(如细胞、基底膜、粘液、纤维等)。适用于细胞涂片、冰冻切片、石蜡组织切片样本。临床中常用于诊断幽门螺杆菌感染、侵袭性真菌感染性疾病、梅毒、淋病、脑膜炎、猫抓病、鼻硬结病、杆菌性血管瘤病、肉芽肿性炎、化脓性炎、恶性黑色素瘤、上气道疾病及矽肺等环境性、职业性肺病,并有助于重度异型增生是否突破基底膜(即早癌)的诊断和鉴别。而该种方法又是猫抓病、鼻硬结病、尘埃颗粒相关疾病、幽门螺杆菌感染、鼻-鼻窦侵袭性真菌病的首选和金标准染色方法。
【检验原理】:利用生物组织成分对银离子还原性质的不同,借助显影液中对苯二酚对银离子的还原显影作用,使不同组织部位银离子密度不同,从而显示从浅黄色到黑色不同的色彩,也因此显示出组织及其中寄生微生物、异物的形态。
【主要组成成份】(注:不同批号试剂盒中各组份可以互换)
浸银液粉一份、显影液粉1一份、显影液粉2一份
【储存条件及有效期】  1、室温、避光、干燥保存      2、有效期2年。
【适用仪器】:该实验需实验室配备60℃温箱、光学显微镜。
【样本要求】:本试剂盒适用于细胞涂片、冰冻切片及石蜡切片样本。    
【检验方法】:
1、实验前准备:取15ml溶剂加入浸银液粉缸,将脱蜡到水的石蜡切片(或固定后的细胞涂片、冰冻切片)用蒸馏水涮洗1次后放入缸中;再分别取5ml、10ml溶剂加入显影液粉1、2瓶中。将以上浸银液及显影液共同置于60℃温箱中助溶、浸银(最少30min),完全溶解后取出备用。                                                               
2、实验步骤:
① 将浸银液缸内的液体全部倒掉,蒸馏水涮洗2次;
② 将显影液1中液体倒入显影液2中,快速摇匀后加入到浸银液缸中,显影1-5min左右(以组织呈现咖啡色为宜);
③ 倒掉浸银液缸中的液体,自来水涮洗2次;
④ 脱水透明封片。
3、实验结果:各种组织结构(如神经组织、肌组织、基底膜、粘液、纤维等)细胞的细胞浆为浅黄色或浅灰色,细胞核呈黑褐色,组织纤维为黑色至棕黄色;幽门螺杆菌、海尔曼杆菌、梅毒螺旋体、钩端螺旋体、鼻硬结杆菌、Rochalimace属杆菌应呈现细腻而清晰的黑色S形、杆状、海鸥状、螺旋状、球状、短棒状;巴通菌(细胞内)呈黑色棒状、链状、分枝状、分隔状、网状;侵袭性真菌的孢子呈现黑色的点状,菌丝常肿胀变形,呈节段性的棒状、丝状;双球菌为黑色双球状;炎性渗出物呈现黑色至黄色的脓肿、肉芽肿;尘粒、矽结节呈现黑色粒状、结节状;黑色素颗粒呈现黑色嗜银颗粒等。(附例图)。
4、注意事项:配制溶液的溶剂可选择去离子水、蒸馏水、纯净水,但不能用自来水及矿泉水。另外,实验前准备及实验全过程均需避免阳光直射。
【参考值(参考范围)】:
1、幽门螺杆菌
(1)、阴性:染色后样本组织内无待检细菌出现。
(2)、阳性:染色后样本组织胃粘膜表面及小凹内可见待检细菌,半定量如下:
              (+)轻度:胃粘膜表面及小凹内偶见待检细菌;
              (++)中度:胃粘膜表面及小凹内可见散在的待检细菌,未聚集成簇;
(+++)重度:胃粘膜表面及小凹内可见大量待检细菌,聚集成簇或片。
2、其它微生物及异物:
(1)、阴性:染色后样本组织内未见待检微生物及异物出现。
(2)、阳性:染色后样本组织内可见待检微生物和异物。

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