常规HE 染色易出现的问题、原因及解决方法（一）转载杂志文章
此文转载于《诊断病理学杂志》2008年6期
常规HE 染色易出现的问题、原因及解决方法
田玉旺,李 琳,朱红艳,邢 宜,苗金红 (北京军区总医院病理科, 北京
1 染色中组织切片脱落的原因
1. 1 组织自身原因及处理不当 ①组织自身原因,如凝血块、血栓、干涸或过硬的组织及组织碎屑等,其切片染色时易脱落; ②组织脱水、透明不足,以致石蜡不能浸入勉强切出的片子,脱蜡时收缩,入水或染色后又膨胀,因而易脱落; ③组
织脱水、透明过度,浸蜡时间过长或温度太高,引起组织收缩硬脆,导致切片不完整,染色时导致脱落。
对发脆的组织可选用下面方法处理,使切片完整、不易脱片: ①用棉球蘸5 %氨水或20 %冰醋酸涂抹蜡块组织表面
10 s左右; ②蜡块修出组织面,放入冰水混合液中几分钟或用冰块贴敷组织面。
1. 2 切片 ①切片过厚,组织附贴在载玻片上不平,使切与玻片之间存有一定间隙,切片与玻片之间的吸附力减弱;②破碎不整齐的切片; ③展片水温低,切片有皱褶、附贴不牢或附贴时切片下含有气泡; ④烤片时间短或温度低、烤片温度过高或时间过长、组织被烤焦或收缩变形发生皱褶均易脱片; ⑤载玻片清洗不洁净,含有油脂或混入脏东西等。故载玻
片应先放入清洗液内浸泡,捞出后彻底水洗,95 %乙醇进一步脱脂,而后干燥箱烘干备用。现多采用免洗载玻片,效果较
好。对于特殊组织要进行特殊处理,如脑、脊髓等组织,捞片后不能马上直接烤片,待切片与载玻片之间水分充分沥干后
再放到烤片箱的铁板上进行烤片,以避免切片出现气泡。
1. 3 染色 ①脱蜡后未经自高至低的各级乙醇缓冲调解逐渐入水; ②染色时,用水冲洗过猛或振荡过度,致切片与载玻
片脱离; ③染液或试剂的酸碱度不适宜或在其中停留时间过久,如染色所用的返蓝液碱性过大时易引起切片脱落。针对这种现象,我们可以采用自来水返蓝,因为自来水多呈弱碱性,pH 715～718 ,同样可达到返蓝目的; ④HE 染色过程中,
切片多用1 %盐酸乙醇进行分化,工作中发现,脱片也易发生在盐酸乙醇分化后。1 %盐酸乙醇的分化作用主要依靠盐
酸在水中容易电离出氢离子,用来改变组织的电荷性质,使过染和吸附在组织表面的染料从组织中及表面脱落下来,从
而达到分化的目的。根据盐酸的性质,盐酸在水中电离出的氢离子要比在乙醇中电离出的氢离子多,我们认为传统的
1 %盐酸乙醇用于分化乙醇在这里并不起作用,相反,由于乙醇的存在致使切片更易脱落,因为乙醇具有脱水及使组织收
缩的作用,分化后水洗时组织又发生吸水、膨胀。而造成脱片。为此,我们认为改用1 %盐酸水溶液进行分化,可避免
脱片现象的发生; ⑤染色失当或效果不良,返工重做; ⑥染液及染色用具不洁净; ⑦脱片与水质有关。由于各地区水质不
同,有的地区自来水内含有大量的矿物质,故漂片用水的纯净与否亦是造成组织脱片的一个重要因素。
2 切片染色不均的原因
2. 1 组织取材固定不当 如组织取材过大或过厚、所用之固定液浓度过大、穿透力较小时,不能将组织完全固定,组织
切片染色后出现切片外周固定好的部位细胞着色清晰,但中间或未固定好的组织细胞着色模糊,从而造成染色不均。
2. 2 组织脱水时间过短 组织中含有水分,进而使透明、浸蜡不彻底。这种处理不彻底的组织,虽然有时也能勉强切片,但切片薄厚不均,在染色时就会出现染色不均,片状灰染现象。
2. 3 切片厚薄不均或有横纹
2. 4 染色过程处理不当 ①组织切片脱蜡不彻底,如溶蜡剂及乙醇不纯或使用时间过久、室温低时,组织切片上的石
蜡没有全部除掉时、含蜡部分不着色或着色较浅而无蜡部分着色较深,因此造成染色深浅不均; ②染液或试剂量少,组织
切片没被全部浸染到; ③分化不当、分化剂浓度过大、分化力过强、分化后没有迅速入水终止分化,可造成染色过淡、过深或染色不均等现象; ④如果组织切片上有气泡,则气泡内的组织可能染不上色,以致镜下出现染色不均现象。
（未完待续）
