九日

此文转载于《诊断病理学杂志》2005年4月第12卷第2期

一种防脱玻片的制作方法
作者：胡小安,张　润,卢　静
　玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤之一,如果处理不当,在染色过程中出现掉片,不但影响日常工作,也浪费试剂。多聚赖氨酸( Poly2L2Lysine) 具有良好的防脱片效果,为目前国内大多数病理实验室所采用。制作防脱玻片的方法有多种,我们采取两玻片反推法制作防脱玻片,操作简单,节省试剂。
1 　材料与方法
111 　材料　多聚赖氨酸(福州迈新生物技术开发公司提供) ,磨砂载玻片250 张,5 ml 注射器1 支,洗衣粉少许。
112 　方法　将玻片放入盆内,加洗衣粉少许,倒入40 ℃左右温水浸泡30 min ,自来水充分冲洗过夜,过蒸馏水2 遍,再放入95 %乙醇中1 h ,取出沥干。用注射器抽取多聚赖氨酸014 ml ,蒸馏水316 ml ,放入10 ml 量器中混匀,配成1∶9 的多聚赖氨酸溶液。取洁净的载玻片数张,磨砂面朝上放于桌上,用注射器抽取上述配好的溶液,在每张玻片上注入少许。另取玻片磨砂面向下,在注有溶液的玻片上从无磨砂的一端相互反向将溶液推向另一端,直至玻片磨砂处停止。此时,溶液在两玻片之间均匀分布,无气泡和空隙。将夹有黏附剂的两玻片平放。于室温下晾干或40 ℃烤箱内烘干后,分开玻片,置盒中于4 ℃冰箱内保存备用。
2 　结果
防脱玻片黏附剂涂布均匀,粘贴牢固,而且耐高温,透明度好。
3 　讨论
多聚赖氨酸(Poly2L2Lysine) 溶液是专门用于防止石蜡切片和冷冻切片在各种组织染色中脱片的黏附剂。由于溶液中多聚赖氨酸分子可与组织切片中氨基酸位点结合,从而使组织切片能牢固地黏附于载玻片上,不易脱片。因此,在载玻片上黏附剂是否涂布、涂布是否均匀一致直接影响防脱片的效果。工作中常用的浸泡法,不仅试剂用量大,而且由于玻片在浸泡时堆放叠压,易使溶液涂布不均,即使一张一张地将玻片从多聚赖氨酸浸泡液中提出,玻片表面溶液呈水膜状,但在沥干或晾干的过程中,由于液体的分子热运动和表面张力作用,会使黏附剂溶液不断移动,面积缩小,玻片干燥后,留下不均匀分布的斑块状黏附剂痕迹,影响防脱片效果。其他方法如用棉棒、针头等涂布黏附剂也有此现象。采用两玻片反推法,液体移动受到限制,从而使黏附剂在两玻片之间均匀分布,玻片干燥后,没有斑块状涂布不均的痕迹,透明
度好。用洗衣粉温水浸泡玻片,由于洗衣粉中含有高效表面活性剂、蛋白酶和多种助洗剂,能有效地去除玻片表面的油污,有较好地清洁作用,与用硫酸清洁液浸泡的玻片无明显差别。我们用此种方法处理的防脱玻片进行免疫组化染色、热抗原修复及酶消化处理,均不易脱片,效果良好,而且节约试
剂,操作简单,值得一试。

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