改进病理制片技术提高病理确诊率（转载）
此文转载于《南通大学学报( 医学版)》2005∶25 (4)
改进病理制片技术提高病理确诊率
作者： 郭 霞
1 切片的制作
切片的制作主要包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等过程。只有通过病理技术员的悉心操作, 才能使其做到切片完整、厚薄均匀、表贴得当、染色鲜艳、对比分明、切片整洁、标签清楚端正。
1. 1 标本的收取 病理科工作人员收验标本时, 必须严格执行查对制度: (1) 送检标本姓名、种类、数量是否与送检单相符; (2) 固定液种类是否正确、量是否足够; (3) 送检单项目填写是否全面、清楚。若发现有错误或疑问应立即和临床医师联系, 查清楚后方可签收。
1. 2 标本的固定 病理组织的固定是制片的关键。为使组织得到及时、恰当、充分的固定, 本文采用:
(1) 病理科统一配制固定液分发到临床手术科室, 并介绍使用方法和要求; (2) 外科手术切除的标本应立即放入10% 甲醛固定液, 并及时送病理科; (3) 病理科收到标本后, 用流水冲去标本表面的粘液和血液,加入新鲜足量的10% 甲醛液再固定, 固定时间因组织的大小而异, 巨大组织要切成小块固定, 时间≥5h; (4) 标本取材后再放入10% 甲醛液中补充固定1
～ 2h。
1. 3 组织的脱水 最常用的脱水剂为乙醇, 浓度由低到高, 逐步置换出组织内的水份。组织脱水时间的长短可根据组织块的大小、厚薄和温度高低而定, 对于含水份较多的脑组织、纤维结缔组织和皮肤组织等应适当延长固定时间。另外病理组织在低浓度乙醇的脱水时间可适当延长, 而无水乙醇时间则不宜太长, 以免组织收缩变硬。最后病理组织经过无水乙醇脱水进入二甲苯透明时, 应尽量甩干架子上的乙醇。
1. 4 组织的透明 透明多采用二甲苯溶液, 病理组织经脱水后放入二甲苯透明。在透明过程中, 必须注意掌握好透明时间。如果病理组织在二甲苯中透明时间过长, 会引起组织变脆, 较难切出完整切片, 时间过短, 组织内仍留有水份, 也不易切出较薄的切片。因此对较小的组织可适当缩短透明时间, 而对较厚的特殊组织, 应适当延长透明时间。总之, 要做到透明适当, 就必须在操作过程中多观察, 一旦发现组织呈透明状时, 表明组织内已完全无水, 应转入下一操作环节。
1. 5 组织的浸蜡 浸蜡多采用纯净而熔点稍低的石蜡。病理组织经过透明后要尽量吸去其表面的二甲苯然后进行浸蜡, 以免组织浸蜡不充分造成切片时出现裂痕。浸蜡时间依据病理组织块大小厚薄而定, 一般为1～ 3h, 浸蜡时恒温箱的温度应比所用石蜡熔点稍高, 以保持石蜡恰在熔溶状态, 使病理组织取得良好的浸蜡效果, 但浸蜡时恒温箱的温度要恒定。
1. 6 组织的包埋 包埋石蜡的温度要比组织稍高2℃～ 4℃, 包埋的动作要迅速敏捷。包埋时尽量把组织****、最平切面或所需的病灶切面向下。皮肤、肠管、囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。有条件的医院可使用国产或进口的半自动包埋机包埋组织。
1. 7 组织的切片 石蜡切片必须事先准备好锋利的切片刀, 并调整好刀架上刀的角度, 拧紧切片机上的螺丝。切片的厚度通常为4Lm, 切片时手摇的力度要均匀, 确保切出连续的、厚薄均匀的蜡片。然后选取平整光滑、无污染的蜡片置入恒温水浴盆(水温控制在45℃～ 49℃间) 内展开, 用预先洗净擦干并编好相应号码的载玻片捞取最完整、平滑无皱、无刀痕的一张或数张蜡片; 捞取切片时使切片与载玻片沿长轴方向平行, 使切片按顺序连续平整粘附于载玻片
上, 并用纱布吸去多余水份。待全部切完后按顺序排好, 及时放入烘片箱内, 烘片箱温度设定为80℃～90℃, 烘烤15～ 30m in。
1. 8 切片的染色 染色过程要注意以下几点: (1)染色所用试剂由专人负责配制, 定时检测定时过滤,定时更换并做好详细记录; (2) 切片脱蜡要干净, 脱蜡时间可适当延长, 烘片后要趁热放入二甲苯, 冬季二甲苯可放入恒温箱加温; (3) 苏木精染色后用流水冲洗来促蓝, 使苏木精色淀又重新形成, 流水冲洗一般需15～ 30m in; (4) 盐酸乙醇分化要适度, 时间一般为1～ 2s, 具体视组织的性质、切片厚度、苏木精染色的深浅来决定; (5) 伊红染色要适当, 伊红只是作为对比染色, 尽量做到色彩鲜艳、红蓝分明、切片结构清晰。
1. 9 切片的封固 用事先配对好的中性树胶封固切片。配制中性树胶时加入二甲苯的量要适中, 太稠封片时易产生气泡, 太稀又易外溢, 有碍美观。封好切片后在玻片左侧贴上编好号码的标签。
2 人员的要求
切片质量低劣会让病理医师难以做出正确诊断。故病理技术人员在操作过程中, 必须认真做到以下几点: (1) 严格按照规章制度操作, 不得任意更改操作规程; (2) 在切片制备流程的每一环节上反复核对, 防范差错; (3) 每批片子完成后, 对照切片质量评判标准, 进行自我质量检查, 发现不合格的片子不能送交诊断医师, 必须重新切片; (4) 熟悉制片过程各
环节的基本原理, 刻苦钻研业务技术, 对技术精益求精; (5) 具有高度的法律意识, 增强自我保护意识, 认真做好病理文字记录, 保管好检材的石蜡包埋组织块和原切片等实物资料, 必要的图像资料和大体标本等。
3 病理科的技术基础设施保障一张制作优良的切片既需要技术人员精湛的技术和精心操作, 同时也离不开性能优越的仪器设备。病理科必备的基础设备有: (1) 自动脱水机; (2) 切片机; (3) 磨刀机; (4) 漂片机; (5) 恒温箱等。较高层次
的设备还应有超薄切片机、冰冻切片机、电子图像存储仪等。
