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95%酒精固定对免疫组化的影响

多聚甲醛固定影响要比甲醛小

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原帖由 shanghainese 于 2011-4-18 07:24 发表

请您讲出道理来。
甲醛固定液
主 要包括10%福尔马林(40%甲醛与蒸馏水之比为1:9),10%中性福尔马林(10%福尔马林喊饱和碳酸钙)和10%中性缓冲福尔马林(40%甲醛与 0.01mol/L PBS之比为1:9)三种,以第三种应用最广。甲醛在有效保护某些抗原的同时,能很好保持组织形态结构的完整。但由于甲醛使蛋白质发生交联而起固定作用, 这样会影响细胞膜的通透性,有时会使大分子抗原丧失其活性。经甲醛固定过的组织,大多数抗原在免疫染色前必须经蛋白酶消化,以打开抗原决定族,使阳性率及 阳性程度有明显的提高,但消化也可破坏某些抗原。用甲醛固定时以不超过24h为宜。

4%多聚甲醛
用0.1mol/L磷酸缓冲液(PH7.3)配置而成(必要时加少许1mol/LNaOH使溶液清凉)。适用于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续固定2-24h。该固定剂较为温和,适用于组织标本的长期保存。

目 前,免疫组织化学研究中常用的固定剂仍然是醛类固定剂,其中又以多聚甲醛和戊二醛最为常用。多聚甲醛和戊二醛都是交联固定剂,既能更好的保存组织细胞的形 态结构,又能使蛋白质得以固定。尤其是戊二醛,因为其有两个醛基,交联连接的能力更强。对于小分子的抗原,如肽类激素,只有用交联固定剂才能得到良好的固 定并且是抗原得到较好的保存。然而,醛固定剂也有缺点,即由于广泛形成的交联连接,可以造成某些抗原被掩盖,甚至导致抗原变性,特别是对大的蛋白质抗原。 这样的缺点在戊二醛表现得更加突出,所以在光镜标本中一般不使用戊二醛,只是在电镜标本中为了利用戊二醛两好的保存组织细胞超微结构的优点,而在多聚甲醛 固定液中加入适量的戊二醛。在光镜标本的固定中,也常常使用Bouin固定液,它能迅速穿透组织,使固定充分,又不引起组织收缩,其中的苦味酸可以沉淀蛋 白质。

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