dingwei

免疫组化显色完成后，发现切片上有二区域不显色，本以为是抗体或DAB未加到，重新加一抗、二抗、DAB显色后还是没有颜色，请问大家有没有碰到类似的情况，是什么原因造成的。

dingwei

想不出原因：我用不脱蜡的片子、脱蜡后二甲苯不经酒精直接水洗等条件都做都过，就是无法重复做出此现象，也就是说与脱蜡过程没关系，阻断液一直是用以前配好的，也没问题，不知问题出在那。同一蜡块切的片子，其他都做得都是好的，再做也是好的，蜡块（组织前处理）也应该没问题。
是不是片子切好后碰到什么液体，把抗原破坏了？玻片上有二点强酸没洗干净把抗原破坏了？可能性也非常小。

dingwei

引用:

原帖由 xiaoniou777 于 2011-8-19 17:58 发表
也就是说重做以后没有这种情况？

出现白点的片子重做还是不着色。

dingwei

是的，关键问题是要推断操作问题出在那一步。

dingwei

不会，同一抗体同一天有十几张切片都没有此现象。如果是，在同一切片上第二次再加一抗重做，不可能不结合。

dingwei

摊片时候的气泡不是这样的，也不会不着色，应该是着色加深才对。
如果滴某液时候有气泡，那第二次重加会着色。

dingwei

引用:

原帖由 xkj2797xkj 于 2011-8-31 21:05 发表
如果某液滴加时有气泡，第二次再染应该是不上色de！

为什么？你有实验证明过吗？

dingwei

你的推论是错的，我们经常把阴性的免疫组化片退了，重新加其它抗体，结果一直很好（原因是医生在诊断时开的免疫组化项目，考虑的疾变与结果不符，为了不再切片，就拿以前的片子把树胶脱了重新加一抗；或医生怀疑你抗体漏加了，重新加一次；或下面医院送来的会诊免疫组化，没有白片，只有在原来的阴性片上加其它抗体，结果都很好。只要你的抗原没有被相对应的抗体接上去就能再结合。

dingwei

去掉玻片，用二甲苯洗去树胶，然后用酒精去二甲苯，水洗，加一抗、二抗、显色就行。
如果你觉得他的抗原修复没做好，也可以重新修复。
至于收费，应该是一样的。

dingwei

引用:

原帖由 天涯无风 于 2011-9-5 12:48 发表
很有可能是苏木素复染了以后抗原位点被覆盖了，造成阴性。

苏木素不会把浆着色的位点覆盖，那怕就是有，也不会是全部。