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染色

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苏木素染色时间要根据染料的新旧、温度、切片的类型而定,一般为5-15分钟。经水略洗后,用盐酸酒精分化,分化程度必须用显微镜控制。分化水洗后,可用温水或自来水蓝化,并充分水洗(流水冲洗5分钟以上),以防盐酸残留导致切片褪色。我们不提倡使用碱性溶液(释氨水、肥皂水等)促蓝,尽管蓝化效果很好,但从实践的结果来看,用碱性溶液促蓝的切片不能长期保存,容易褪色。最后入伊红复染(5-20秒)。HE染色的关键在于深浅适度,对比鲜明,一般有经验的,肉眼就能判断,但偶而也会出现失误,所以用显微镜控制是最保险的方法。其关键的步骤在于苏木素染好后的分化及蓝化过程,在蓝化结束后,应在显微镜下观察细胞核着色是否合适,核结构是否清晰,胞浆内是否有残留的苏木素等等。染色理想的切片在显微镜下应是:细胞核与细胞浆应蓝红相映,鲜艳美丽;核浆对比明显,核膜及核染色质颗粒清晰可见。

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我没这方面的经验,不过HE切片我不赞成用中性福尔马林固定,我是用酸性福尔马林。 85 ML自来水,加 12 ML福尔马林,加 5 ML冰醋酸。固定后要水洗。

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没有的事,我做了很多实验,发现大多数抗体与中性与酸性无关,只有极少量的如:ER、PR等略有影响,而现在的试剂盒敏感性强,已经可以不计了,我查了文献,也有此报导,国外也不是全用中性固定,象英国免疫组化控制中心的规定,也不用中性。你可以试一下人家说的不一定是对的。

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