liflit

本人用冰冻切片机进行切片，组织取材7um，之后进行HE染色，大致过程为mayer液——伊红——剃度酒精——二甲苯，然后在显微镜下观察，开始较好，片之颜色较正常，空气中干燥2min后，镜下迅速变黑，无法辨认细胞。
咋回事！！

shanghainese

您可能忘了封片吧?

hot天使

对呀，你有没有封片？

liflit

[这个贴子最后由liflit在 2004/01/03 07:44pm 编辑]

因为后续实验要从该片上取下所见细胞，所以不能封片，以前有人染过，结果还可以，怎么我染的什么也看不出来。下面是我的染色过程，时间操作的不太严格，影响会很大吗？
100% ethanol - 15 sec
95% ethanol - 15 sec
70% ethanol - 15 sec
Deionized water - 15 sec
Mayer's Hematoxylin - 30 sec
水洗 10 min
Deionized water - rinse (x 2) - 15 sec
70% ethanol - 15 sec
Eosin Y - 5 sec
95% ethanol - 15 sec
95% ethanol - 15 sec
100% ethanol - 15 sec
100% ethanol - 15 sec
Xylenes (to ensure dehydration of the section) - 60 sec
Air-dry for approximately 2 minutes
实际操作中，mayer液时间从大约10秒至30秒均试过，影响不大

shanghainese

下面是我把您的的染色过程改了一点，请您试试。
100% ethanol - 15 sec
95% ethanol - 15 sec
70% ethanol - 15 sec
Deionized water - 15 sec
Mayer's Hematoxylin - 30 sec
水洗 10 min
Deionized water - rinse (x 2) - 15 sec
70% ethanol - 15 sec
Eosin Y - 5 sec
Deionized water - rinse (x 2) - 15 sec
用甘油或PBS封片。(这是临时性的封片，可以从该片上取下所见细胞。)

liflit

感谢各位帮助，今天试过好多了

〖非我莫属〗

其实染色没什么关系，还是封片的原因，同意用缓冲甘油先封片！

yjd

楼主及楼上的现象及方法非常好，这提示我们病理技术人员的工作责任心是非常重要的，特别是出现的问题要从常规理论上找原因。

葵花

缓冲甘油土封片是怎样的处理方法

海燕

请问：
你所使用的冰冻切片机是何种型号？效果如何？huifu :fhy1975@163.com