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二甲苯浸泡肾组织泡了2h都不透明而且很黑很硬,求高人指点!

二甲苯浸泡肾组织泡了2h都不透明而且很黑很硬,求高人指点!

本人在做肾组织的石蜡切片,肾组织是从-80℃里拿出来的,在4℃里放了会,然后10%福尔马林固定24小时。后面的梯度酒精脱水都很注意,每换一次酒精的时候都把瓶子吸干净了。

50%(1h)→70%过夜→80%(2h)→95%Ⅰ(90min)→95%Ⅱ(90min)→100%Ⅰ(1h)→100%Ⅱ(1h这里估计超过了20分钟)→二甲苯酒精(1:1 20min)→二甲苯Ⅰ(30min)→二甲苯Ⅱ(2h都还不透明)

我的步骤如上,二甲苯放了这么久都还不透明,组织又黑又硬,我估计两步有问题:冻存和无水酒精时间长了。。。

麻烦大家帮我分析下!!我现在主要是想找找补救的办法!谢谢!

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另外,请教一下,软蜡可以过夜么?

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这样的步骤做的肾切片,切时组织碎吗?我想切片时应该是不好切,组织应该碎。透明应该根据自己的经验。不知对否?

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做肾组织切片,我们尽量不过夜。这样有时组织块硬不好切。

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