返回首页 | 病理技术专题 | 病理资讯 | 病理图库 | 病理技术精英 | 同行交流 | 技术会诊 | 点滴经验 | 常规切片 | 特殊染色 | 分子免疫 | 细胞园地 | 电镜技术 | 收藏本站
发新话题
打印

求助-血管的Verhoeff Van-Gieson弹力蛋白染色红色染不上为什么

求助-血管的Verhoeff Van-Gieson弹力蛋白染色红色染不上为什么

各位前辈高人,不知道有没有高人对组织染色比较有经验的。
我做一个脑动脉瘤动物模型,然后动脉瘤局部的脑动脉管壁想染一下弹力蛋白,用的是Verhoeff Van-Gieson方法。由于买sigma的试剂实在太慢,于是就自己买了原料按照protocol自己配液染的。结果verhoeff法染IEL的弹力蛋白还可以,呈黑色。但是van-gieson本来染完,应该看到有呈红色的胶原蛋白,但是我染出来除了黑色就全是黄色了。不知道为什么。下图染的是正常的脑动脉血管。想请教一下这个染色不好可能是因为什么问题?或者有没有染弹力蛋白的经验,别的染色方法也行。
非常感谢!!!








用的protocol大致是:

溶液:

1)5%酒精苏木素染液:

5克苏木素溶解于100ml100%酒精中,可轻微加热助溶,过滤后保存备用。

2)10%三氯化铁溶液:

10克三氯化铁溶于100ml水中,即配即用。

3)Weigert’s 碘溶液:

取2克碘化钾溶解于少量水中,待其溶解完毕后于上述溶液中加入1克碘,待碘溶解后,立即加水稀释溶液,定容至100ml。溶液棕色瓶中避光室温保存。

4)Verhoeff’s工作液:

分别取20ml 5%酒精苏木素溶液,8ml 10%三氯化铁溶液,8ml Weigert’s 碘溶液;混合均匀别用(此溶液现配现用,用后即丢弃)。

5)2% 三氯化铁溶液:

由10%三氯化铁溶液稀释(现用现配)。

6)5%硫代硫酸钠水溶液。

7)VG染色液:

1ml 1%酸性品红,加饱和苦味酸45ml。

染色过程:

1、石蜡切片脱蜡至水;

2、切片入Verhoeff’s工作液1小时,至切片全部染成黑色后蒸馏水漂洗3次。

3、切片入2%三氯化铁分色1至2分钟;

4、分色完毕后切片入流水冲洗,光镜下观察:此时弹性纤维被染色黑色;背景为灰色;

5、流水冲洗后切片入5%硫代硫酸钠溶液1分钟;流水冲洗5分钟;

6、切片入VG染色液复染3至5分钟;

7、梯度酒精快速脱水(95%酒精一次,100%酒精两次);二甲苯透明;封片。

8、染色完成后弹性纤维呈黑色或蓝黑色,细胞核呈黑色或蓝黑色;胶原纤维呈红色;肌纤维呈黄色
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件

TOP

发新话题