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自动染色机应用于快速冰冻切片染色的可行性探讨

自动染色机应用于快速冰冻切片染色的可行性探讨

近年来全自动染色机逐渐被各大医院及相关实验室所接
受并替代常规石蜡切片HE 染色和脱落细胞学涂片HE 染
色,国内已有很多使用自动染色机的报道,染色效果好,减少
人力,但是使用自动染色机应用于快速冰冻切片尚未见报道,
在几年的工作中,通过实践摸索,选用了最适于本科室的染色
程序提高了快速冰冻切片效率和质量,现介绍如下。
1 Leica ST5020 自动染色机的使用和结果
1.1 仪器设备德国Leica ST5020 自动染色机(26 个试剂
缸,6 个水洗缸,2 个烤片箱,2 个进口位,2 个出口位, 附塑料
玻片架等)
1.2 试剂乙醚-乙醇溶液,95%乙醇,harris 苏木精,l%盐酸
乙醇,1%水溶性伊红,无水乙醇,二甲苯。
1.3 操作方法(1)先将冰冻切片载玻片的磨砂面标出组织
块的编号,然后将切出的切片用乙醚-乙醇固定[1],固定1 min;
(2)再放入染色机配套的玻片架中置入自动染色机的进口位。
根据颜色自动选择相应的程序开始染色;(3)染色结束,染色
机的机械臂自动将玻片送入封片机准备封片;(4) 封片结束,
仪器发出提示音,从升降上取下,贴标签。
1.4 冰冻切片HE 染色程序由于机械臂的行进线路并不
是单一的直线型,存在特定的迂回性,为了缩短时间,减少污
染[2],结合本科室的实际工作情况设定了HE 染色的染色程序
(表1)。
可以保证在冰冻切片和常规石蜡切片同时染色时优先染
冰冻切片。
1.5 结果经长期的操作发现应用自动染色机染色后整个
术中冰冻切片时间不超过15 min,染色后的组织结构完整,
细胞染色清晰且境界清楚,核质分明,对比度好,如图1、2
所示。
2 讨论
随着病理技术的发展,冰冻切片检查不仅是鉴别良、恶性
肿瘤准确快速的方法,还广泛应用于脂肪黏液染色[3]、酶组织
化学、免疫组化[4]、免疫荧光、核酸原位杂交及原位PCR 等病

理诊断与研究领域。切片的质量不单是技术问题,它的优劣对
病理诊断的准确性至关重要,对能否缩短手术等候的时间,减
轻患者痛苦起着重要作用[5]。而现在术中冰冻越来越多,而传
统的手工染色会因天气、染色时间、试剂的浓度、环境、个人差
异等因素而使胞质、胞核染色深浅不一, 对比不均。Leica
ST5020 染色机可同时处理12 个玻片架, 每个玻片架容量是
30 个样品玻片,样品处理量大,同时处理多个不同程序,且自
动染片机因为预先设定好染色程序、时间,使每一次的染色步
骤和时间均能一致,胞质、胞核结构对比清晰,染色鲜艳、均匀,
且省时、省力[6]。与封片机联机应用,染色封片自动完成,节省人
力,工作效率高,稳定性好,无掉片现象,对操作者的身体伤害
轻。在这期间可进行下一个冰冻切片的冰冻和切片过程,切完
把片子固定后上机, 然后再把上一个染好的冰冻片核对贴标
签,因此可处理术中源源不断送来的组织进行冰冻切片,有利
于及时、准确发出冰冻快速病理报告,工作效率大大提高。
但我们发现由于机器本身的特点, 具体操作时有一定的
局限性,机械臂的起落都需要有一定时间作自我调整和检测,
最关键的因素就是时间的预测问题。当同一染色机里的染色
架≤4 时, 机械臂的起落时间不易起冲突, 便于计算出片时
间。同一染色机里的染色架>4 时,由于机械臂的起落时间及
染缸的使用会发生冲突,会明显拖延出片时间,可预测性差[2]。
另外,影响冰冻切片的质量关键在设定好染色机的3 个参数:
MUMBER OF DIPS(浸液次数)、LIFTING SPEED(提升速度)和
DIP AMPLITUDE(浸液幅度),增加浸液次数能增强脱水效果,

但会减少仪器处理量,延长时间,提升速度指示玻片架从试剂
缸移出的速度,速度越慢携带的试剂越少,但时间增加,速度
太快易掉片,浸液幅度大、染色机的水洗太都会增加时间,我
科把MUMBER OF DIPS 设置为3 (可选范围1~9),LIFTING
SPEED 设置为2 (可选范围1~9),DIP AMPLITUDE 设置为2
(可选范围1、2)。
综上所述,当Leica ST5020 染色机里的染色架<4 时,冰
冻切片的染色可与石蜡切片的HE 染色同时进行, 染色效果
稳定, 节省人力, 且能优先染冰冻切片; 如染色机里的染色
架≥4 时,只能手工染色。

                        表1 冰冻切片HE 染色程序
             步骤      试剂缸位置     试剂            时间     精确        浸液
              1              9             水洗缸          0:00:10    是            是
              2            21             苏木素         0:03:00    是            是
              3           10              水洗缸          0:00:10     否           是
             4            22       1%盐酸乙醇         0:00:02     是           是
             5           11         水洗缸                0:00:50     否            是
             6           23          伊红1%              0:00:05     是          是
            7            24          95%乙醇           0:00:05      否          是
            8           32          100%乙醇          0:00:10      否          是
            9           33         100%乙醇           0:00:10      否          是
          10           29          二甲苯                0:00:20    否            是
          11         封片          封片程序
注:精确计时的步骤在程序中指定为“是(精确时间)”,比如说
苏木素、盐酸乙醇、伊红,可以保证在冰冻切片和常规切片同
时染色时优先染冰冻切片


[[参考文献]
[1] 张乃鑫. 临床技术操作规范-病理学分册[M]. 北京: 人民
军医出版社, 2004:36-38.
[2] 孔静萍, 王红卫, 张雯静, 等. Leica 自动染色机盖片机的
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[3] Soans S, Galindo LM, Garcia FU. Mucin stain on frozen
sections:a rapid 3-minute method[J]. Archives of Pathology
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[4] Richter M, Nahrig J, Komminoth P, et al. Protocol for ultrarapid
immunostaining of frozen sections[J]. J Clin Pathol,
1999, 52(6):461-463.
[5] 杜文越. 冰冻切片技术在病理诊断中的应用[J]. 河北医
学, 2002, 8(11):1022-1024.
[6] 罗小平,李广民,胡维维.自动染片机在HE 染色中的应用
及与手工染色的比较[J]. 诊断病理学杂志, 2007, 14(3):
l79-179, 189.


文章转载于《南通大学学报( 医学版)》2010 ∶ 30(6)
作者:王伟, 施公胜*, 刘益飞
作者单位:南通大学附属医院病理科, 南通226001

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